4型胶原酶的活性受什么影响

‘壹’ Collagenase D是否就是Collagenase IV

胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质，因此，这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感，极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。 胶原酶按其存在的方式不同可分为人体内源性胶原酶和药用胶原酶两种。人体内源性胶原酶是指人体内部本身所具有的胶原酶，如牙龈、触膜等上皮组织和关节滑膜、椎间盘内都不同程度的存在着这种胶原酶，它在体内胶原蛋白的分解过程中发挥着不可或缺的作用。药用胶原酶是指利用生物制药的高科技手段从溶组织梭状芽孢杆菌的发酵液中提取、纯化并精制而得的白色或类白色无菌冻干粉针生物制剂。 胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。 1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细 胞，用于哺乳动细胞的分离。 2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。 3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。 4、胶原酶Ⅱ适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。 胶原酶的配置 胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。 注意： 因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。 钙、镁离子和血清成分不会影响胶原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培养液配制。 胶原酶的使用 1.将漂洗、修剪干净的组织剪成1~2mm3左右小块 2.将组织块放入离心管（三角烧瓶）中加入30~50倍体积的胶原酶溶液，旋紧盖子（密封烧瓶）。 3.将烧瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱内，每隔3min振摇一次，如能放在37℃的恒温震荡水浴箱中则更好。 消化时间与组织的类别很有关系，对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h，对于容易消化的组织可以采用37℃震荡消化15~45min，也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可以认为已消化充分。上皮组织经胶原酶消化后，由于上皮细胞对此酶有耐受性，可能仍有一些细胞团未完全分散，但成团的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生长，因此，如无特殊需要可以不必再进一步处理。 4.收集消化液（有时含个别组织块及没有充分消化的组织碎屑则需用100目不锈钢网过滤），离心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者无血清培养液离心漂洗1~2次，去除上清，加培养液制成细胞悬液，接种培养瓶。

‘贰’ 与皮肤衰老过程相关的一种叫做MMP的酶应该怎么翻译

基质金属蛋白酶(MMP)

基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinases,MMPs)
基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca++、Zn++等金属离子作为辅助因子而得名，其家族成员具有相似的结构，一般由5个功能不同的结构域组成 :（1）疏水信号肽序列;（2）前肽区，主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后，MMPs酶原被激活;（3）催化活性区，有锌离子结合位点，对酶催化作用的发挥至关重要;（4）富含脯氨酸的铰链区;（5）羧基末端区，与酶的底物特异性有关。其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性。MMPs成员上述结构的基础上各有特点。各种MMP间具有一定的底物特异性，但不是绝对的。同一种MMP可降解多种细胞外基质成份，而某一种细胞外基质成分又可被多种MMP降解，但不同酶的降解效率可不同。
MMPs几乎能降解ECM中的各种蛋白成分,破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭转移中起关键性作用，从而在肿瘤浸润转移中的作用日益受到重视，被认为是该过程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分离鉴别出26个成员，编号分别为MMP1～26。根据作用底物以及片断同源性，将MMPs分为4类。
Ⅳ型胶原酶为其中重要的一类，它主要有两种形式，一种被糖化，分子量为92kD，命名为MMP-9;另一种非糖化，分子量为72kD，被称为MMP-2。当前对MMP-2，MMP-9的研究较深入。
MMP-2基因位于人类染色体16q21，由13个外显子和12个内含子所组成，结构基因总长度为27kb，与其他金属蛋白酶不同，MMP-2基因5’旁侧序列促进子区域含有2个GC盒而不是TATA盒。活化的MMP-2定位于细胞穿透基质的突出部位，估计其在酶解细胞间基质成分及基底膜的主要成分Ⅳ型胶原中有“钻头”的作用。
此外，已证实MMP-3 和MMP-10能作用于PG、LN、FN、Ⅲ型和Ⅳ型胶原及明胶。MMP-7能作用于明胶和FN。MMP-1的产生范围较广，可由基质纤维母细胞、巨噬细胞、内皮细胞、上皮细胞产生。正常情况下MMP-1阳性率很低，但在各种刺激下可高表达。有研究显示恶性肿瘤中MMP-1高表达与预后相关。
MMPs的活性受到三个水平的调节，即基因转录水平，无活性酶前体经蛋白水解作用而激活以及特异性抑制因子（TIMP）的作用。

‘叁’ 胶原性疾病的胶原合成酶活性的缺陷

羟赖氨酸有2个重要功能
在Lysyl羟化酶反应中形成的羟赖氨酸有2个重要功能：⑴它是碳水化合物的附着点；⑵保持胶原分子的稳定性。因此，Lysyl羟化酶活性缺陷将导致结缔组织疾病。Ⅶ型EDS是由于前胶原N端前多肽裂解异常，其中A、B2型是由于COL1A2的突变，从而妨碍了前多肽裂解。EDSⅦC型则未发现有I型胶原的异常，裂解是由于I型前胶原N蛋白酶活性的缺陷。 Ⅸ型EDS和Menkes综合征
Ⅸ型EDS和Menkes综合征是X连锁隐性遗传性疾病。主要特征是Lysyl羟化酶活性缺陷所导致的铜代谢异常。其临床表现是膀胱憩室、腹股沟疝、皮肤松弛和皮肤伸展过度以及伴有枕骨角外生骨疣的骨骼异常。人们目前在30多种胶原基因中仅鉴定出上述6种突变的胶原基因，这说明有关胶原基因变异的研究还是刚刚开始，还会有更多的胶原基因变异性疾病需要人们去探索、去认识。

‘肆’ 中药-金荞麦根

没有金荠麦根的

金荞麦[Fagopyrum cymosum (Trey. ) Meisn ] ,
亦称野荞麦,天荞麦,红三七,系要科(Poygonum)荞
麦属中的一个种,大多野生在海拔500 - 3000m的
林缘,灌木丛,田边,道旁,以及阴湿痔薄的山地.它
是中国荞麦属野生种类中分布最广的一种,在我国,
从大巴山以南到中国南部均有分布,泰国,印度,尼
泊尔也普遍存在.
金荞麦是我国民间传统的一种中草药,块根人
药,性平,微凉,味苦,酸涩,具有清热解毒,润肺补
肾,健脾止泻,祛风湿之功效.民间多用于治疗肺脓
疡,自汗盗汗,久痢不止,关节酸痛,多发性脓肿,跌
打损伤等.近年来,研究证明它还具有其它更重要
的功能.如具有抗癌,抑制肿瘤细胞肺侵袭和转移,
祛痰抗炎和抑制血小板聚集,降低还原反应和增强
巨噬细胞的吞噬作用.此外,金荞麦籽粒还具有很
高的营养价值,其蛋白质含量丰富,同时还含有具保
健疗效功能的多种矿质元素和维生素,具有软化血
管,降低人体血脂和胆固醇,防老抗衰的作用.金荞
麦目前仍大多处于自生自灭的状态,资源未得到充
分的保护和利用.本文对其作较为详细的综述,旨
在为进一步开展其潜在价值提供参考.
1植物学特征
金荞麦,多年生草本,高50一150cm,地下有块
根,茎直立,有浅沟,中空,质软,有分枝.叶互生,卵
状三角形或扁宽三角形,径3--8cm,顶端常突尖,基
部心状戟形,托叶鞘近筒状斜形,膜质易裂,长5一
8cm,叶柄细长.花序腋生或顶生,为疏散的圆锥花
序;花两性,有花梗,花单被,花被5深裂,白色裂片
狭长圆形,长约2mm,宿存;雄蕊8,2轮;雌蕊1,花
柱3.瘦果卵形,具2棱,瘦长;种子1,花期7一8
月,果期10月.
2金荞麦的药用成分及功效
金荞麦的块根中主要含有一类原花色素昔的缩
合性单宁混合物,包括:表儿茶素,表二茶素-3一没
食子酸脂,原矢车菊素B一2的3.3'一二没子酸脂.
而这类混合物具有抗癌作用.另外,它还含有芸香
昔,类黄酮等药用成分.这使其具有极为重要的药
理作用.
2.1杭癌作用
孟凡虹等在金荞麦素体外抗癌作用的研究中发
现,浓度为125ug/ml的金荞麦根素对人肺癌,宫颈
鳞癌,鼻咽鳞癌细胞的生长抑制率分别为84.5%,
78.9%,100%.它可使癌细胞的膜RNA, DNA代
谢核分裂受损伤.据研究,金荞麦对肿瘤细胞的作
用可能是通过直接或间接作用于DNA代谢的某一
环节来实现的.
2.2抑制种瘤细胞肺侵袭和转移
癌的侵袭及转移是一个复杂的过程,防止肿瘤
的转移对肿瘤患者的治疗有重要的意义.肿瘤细胞
在转移过程中,分泌IV型胶原酶(MMPS),它可降
解基底膜主要构成成分IV型胶原,从而有利于肿
瘤转移,而金荞麦素能抑制HT一1080人纤维肉瘤
细胞IV型原的产生,但对酶活性无明显影响.
2.3对血小板功能的影响
研究证明:血小板的聚集可促进肿瘤转移.而
有活血化痪功能的金荞麦可改善肿瘤病人血液高粘
态,影响肿瘤细胞的血行扩散和转移.静脉注射
50mg/kg金荞麦,对于ADP和胶原诱导的大鼠血小
板聚集作用有明显抑制作用.
2.4降脂降糖作用
万方数据
中国野生植物资源第20卷第2期
由于自由基可造成胰岛素R细胞的损伤,导致
胰岛功能下降,使血糖升高,而金荞麦富含氨基酸,
植酸和多种维生素,这些物质可对抗自由基对机体
的损伤.这正是它能降脂降糖的机理所在.
2.5镇咳和祛疾作用
金荞麦能促进排痰,有益于引流,可用于治疗肺
脓肿.临床证明金荞麦及其制剂对急性及亚急性肺
脓肿有较突出的疗效,总有效率为82.5%0
2.6抗菌作用
金荞麦提取物没有明显的体外抗菌活性,但体
内研究发现,它有预防感染的作用.在感染前24-
72小时注射小鼠,对感染有较好的保护作用,感染
后及感染同时注射,则无此作用.此外,其提取物对
鸡白痢沙门氏菌,金黄色葡萄球菌,肺炎双球菌,多
杀性巴氏杆菌,猪丹毒杆菌有较好的抑菌活性.
2.7对巨噬细胞吞噬功能的影响
实验证明,金荞麦能加强机体的自我防疫能力.
给小鼠腹腔注射83mg/kg, 48小时后处死,其吞噬
指数较对照提高.
2.8其他作用
临床上,用金荞麦治疗原发性痛经,小儿腹泻,
细菌性痢疾,麻疹等都取得了很好的疗效.
3金荞麦的营养价值
近年来,栽培荞麦的营养,保健作用受到国内外
的普遍关注,作为其近缘野生种的金荞麦的营养价
值尚未得到充分认识.张政等在对其籽粒成分分析
表明:
金荞麦籽粒蛋白质含量高达12.6%,达到优质
禾谷类粮食的蛋白质含量水平;组成上以球蛋白含
量最高,占总蛋白总量的56.3%,以后依次为清蛋
白,醇溶蛋白及谷蛋白.此外,其必须氨基酸含量较
高,尤其是phe, lyr, cys, met及trp的含量显着高于
禾谷类粮食中的氨基酸水平,其必需和半必需氨基
酸占全部氨基酸总量的43.1%,其构成成分接近于
FAO/WHO的氨基酸含量建议模式.
金荞麦籽粒中Cu含量高于小麦粉和稻米的平
均水平,Zn含量与小麦粉和稻米相接近,Se含量明
显高于小麦粉,稻米及荞麦等粮食类.
金荞麦籽粒中生物类黄酮含量在1.6%以上,
与苦荞(1.70%)相当;VE的含量为1. 66mg/100g
以上,高于甜荞(1. 42mg/1008)和苦荞(0. 99mg/
100g);烟酸含量3. 85mg/100g,高于甜荞(3. llmg/
100g)和苦荞(3. 42mg/100g ),也显着高于小麦粉
(2.Omg/l00g).
4开发及利用前景
综上所述,金荞麦无疑是一种经济附加值很高
的资源植物,而且,对土壤要求不严格,田间管理可
较粗放,繁殖易,多采用种子和分株繁殖,繁殖系数
高.这样,不但成本低,而且还能充分利用土地资
源,为农民脱贫致富提供途径.此外,至今对金荞麦
的研究多限于根茎,其他方面的开发还不够深人,所
以,我们不仅要保护金荞麦的野生资源,而且还要发
展工人栽培,把它作为天然产物中开发的重点进行
深开发,发挥其潜在的价值,造福于人类.

‘伍’ 明胶酶有什么活性

明胶酶（gelatinase）或称Ⅳ型胶原酶（typeⅣcollagenase）属于金属蛋白酶家族成员，是能够降解Ⅳ型胶原的特异的一种基质水解酶，其活性与肿瘤细胞侵袭和转移密切相关，衡量药物对肿瘤细胞金属蛋白酶活性的影响是评价该药物抗侵袭作用的一个重要方面。人纤维肉瘤细胞HT1080能大量分泌分子量为72KD和92KD的两种明胶酶。将药液与肿瘤细胞金属蛋白酶提取液共浴，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法可将这两种明胶酶按分子量大小分开，显示两条负染带，根据带的亮度和宽度可判断药物对金属蛋白酶活性的影响，用于抗侵袭和转移药物的作用及机理研究。
明胶酶-作用
本金属蛋白酶提取液主要含72KD和92KD两种明胶酶，将金属蛋白酶提取液电泳后，在反应缓冲液中加入药物与胶条反应，经过足够长时间的温育后，加药者负染带不出现或减弱，则表明药物对明胶酶活性有抑制作用。此外还可将胶压膜处理后用激光光密度计在633nm处对负带扫描进行定量分析。

‘陆’ 胶原蛋白酶反复冻存会影响活性吗

胶原蛋白酶我没有用过，但是其他酶用过很多，教授给我了一句话————酶可以冻存。但不要反复冻融，那会影响它的活性，所以第一次实验就叫我分装，估计每次用量将酶经行分装，需要多少用多少。就不存在反复冻融的问题了。

‘柒’ 基质金属蛋白酶和金属蛋白酶有什么关系

基质金属蛋白酶
(matrix
metalloproteinases,mmps)


基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要ca++、zn++等金属离子作为辅助因子而得名，其家族成员具有相似的结构，一般由5个功能不同的结构域组成
:（1）疏水信号肽序列;（2）前肽区，主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后，mmps酶原被激活;（3）催化活性区，有锌离子结合位点，对酶催化作用的发挥至关重要;（4）富含脯氨酸的铰链区;（5）羧基末端区，与酶的底物特异性有关。其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性。mmps成员上述结构的基础上各有特点。各种mmp间具有一定的底物特异性，但不是绝对的。同一种mmp可降解多种细胞外基质成份，而某一种细胞外基质成分又可被多种mmp降解，但不同酶的降解效率可不同。


mmps几乎能降解ecm中的各种蛋白成分,破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭转移中起关键性作用，从而在肿瘤浸润转移中的作用日益受到重视，被认为是该过程中主要的蛋白水解酶。目前mmps家族已分离鉴别出26个成员，编号分别为mmp1～26。根据作用底物以及片断同源性，将mmps分为4类。

ⅳ型胶原酶为其中重要的一类，它主要有两种形式，一种被糖化，分子量为92kd，命名为mmp-9;另一种非糖化，分子量为72kd，被称为mmp-2。当前对mmp-2，mmp-9的研究较深入。


mmp-2基因位于人类染色体16q21，由13个外显子和12个内含子所组成，结构基因总长度为27kb，与其他金属蛋白酶不同，mmp-2基因5’旁侧序列促进子区域含有2个gc盒而不是tata盒。活化的mmp-2定位于细胞穿透基质的突出部位，估计其在酶解细胞间基质成分及基底膜的主要成分ⅳ型胶原中有“钻头”的作用。


此外，已证实mmp-3
和mmp-10能作用于pg、ln、fn、ⅲ型和ⅳ型胶原及明胶。mmp-7能作用于明胶和fn。mmp-1的产生范围较广，可由基质纤维母细胞、巨噬细胞、内皮细胞、上皮细胞产生。正常情况下mmp-1阳性率很低，但在各种刺激下可高表达。有研究显示恶性肿瘤中mmp-1高表达与预后相关。

mmps的活性受到三个水平的调节，即基因转录水平，无活性酶前体经蛋白水解作用而激活以及特异性抑制因子（timp）的作用。

‘捌’ 我想查一下胶原酶的作用

胶原酶是人体内源性胶原酶是指人体内部本身所，具有的胶原酶如牙龈、触膜等上皮组织和关节滑膜、椎间盘内都不同程度的存在着这种胶原酶它在体内胶原蛋白的分解过程中发挥着不可或缺的作用。要补充胶原酶只要一点点辅助作用对腰间盘明显根本没有什么效果的