鼠尾胶原每次可以提多少

Ⅰ 胶原铺板方式

1、配制0.2％醋酸溶液，经高压蒸汽灭菌后备用。

2、将鼠尾胶原蛋白加入配好的醋酸溶液，过滤除菌，放入-20度冰箱储存。

3、按每平方厘米取2.5微克鼠尾胶原母液加入到6孔板中，使平皿含有5微克平方厘米的胶原，用无菌杆推杆将鼠尾胶原平铺在皿底，打开强风吹60分钟，待干燥，然后开紫外照射过夜（也可不照紫外，干燥后立刻使用，）第二天使用。

胶原是哺乳动物体内含量最多的一类蛋白质，占蛋白质总量的25%~30%，广泛存在于从低等脊椎动物的体表面到哺乳动物机体的一切组织中。

Ⅱ 铺上鼠尾胶原可以照紫外光吗

铺上鼠尾胶原可以照紫兆哪渣外光。紫外光具有消毒杀菌的作用，而鼠尾胶具有大量细菌，使用之前需要消毒杀菌。所以缓游铺上鼠族悄尾胶原可以照紫外光。

Ⅲ 胶原蛋白线面部提升可以维持多少时间

胶原蛋白线面部提升确切效果可维持2-3年，保养得好体内营养充足甚至5－10年以上。
胶原蛋白线面部提升是通过在皮肤下埋线的方式，将长度在10-35mm的胶原蛋白线埋入皮肤，对面部进行“提升”和“除皱”两大功效。
1、不用担心术后的一系列限制 胶原蛋白线区别于一般的锯齿线提升、金线提升，拥有不可比拟的可吸收性。要知道金线提升后，因为面部埋有金线，是不能进行如热玛吉这样的激光治疗的，而胶原蛋白线在填补皮肤胶原蛋白后会直接被吸收，丝毫不用担心术后的限制。
2、术后不会有异物感 皮肤内埋入胶原蛋白线后，不会有任何异物感，术后一段时间就会自行溶解，对于敏感性皮肤的人群非常合适。
3、拥有改善面部气血的效果 使用胶原蛋白线提升后，能够改善皮肤的血液循环，术后7日左右面色会慢慢变的红润，对于脸色苍白的人群有不错的治疗效果。

Ⅳ 有哪位高手能详细指导一下用transwell板做细胞趋化实验的具体方法和步骤吗

1
材料与方法
1.
1
Matrigel：Becton
Dickinson
Compary,
-
20
℃保存；
Tanswell
plate：Costar
,USA
,
#
3422
,聚碳酯膜微孔直径为8μm；
苏木素染液，梯度乙醇，二甲苯溶液。
1.
2
趋化因子的制备
取传代第二天长势良好的NIH3T3细胞,无血清培养基轻柔漂洗两次;
加入无血清培养基,37℃,5
%CO2
培养24
h～48h，收集细胞培养上清；4
℃,12
000rpm
离心,10
min
,取上清；0.22
μm
滤膜过滤除菌；分装,在-
20
℃保存。
1.
3
transwell
培养板准备
所有操作均需无菌操作。-20℃保存的Matrigel
在冰上保2℃～8℃过夜融化。在冰上用预冷的枪头吸取100μl
Matrigel
加入冰预冷的300μl
无血清培养基中,充分混均。取上述稀释的Matrigel
25
μl
加入transwell
板上室,覆盖整个聚碳酯膜,37
℃,30
min
,使Matrigel
聚合成胶。已铺好Matrigel的transwell
培养板置于37℃可保存2
周。
1.
4
Matrigel
侵袭实验(Matrigel
Invasion
Assay)刺激后的各组细胞用PBS
漂洗3
次。以常规方法用无血清培养基制备单细胞悬液,5
×105个细胞/
ml
,每组细胞各分为两部分。胎盘兰拒染实验,细胞活力需大于95
%。Transwell
培养板上室加入100μl
细胞悬液(
5
×104
个)
并加入无血清培养基200
ul
。Transwell
培养板下室加入500μl
趋化因子,37℃,5
%CO2
培养24
h。用湿棉签轻轻擦去Matrigel
凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞。小心取出上室,用线拴住,并做好标记,用冰预冷的甲醇固定30
min。苏木素染色1
min。梯度乙醇脱水(80
%
,95
%
,100
%)
,二甲苯透明。小心将聚碳酯膜自上室基底切取下来,置载玻片上中性树脂封片。附着于聚碳酯膜下表面的细胞在高倍镜下(
×400)
随机取6
个视野[1
]
计数,取平均数。重复实验两次。
注意
2.
1
NIH3T3
细胞制备的趋化因子与胎牛血清
趋化因子是能使细胞产生趋化运动的一类细胞因子[2
]
。目前利用NIH3T3
细胞制备趋化因子做细胞体外侵袭实验的实验室比较多,时间较长且实验步骤繁琐。众所周知,胎牛血清中有趋化因子,我们在不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810
胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱实验中发现用胎牛血清和用NIH3T3
细胞制备的趋化因子做细胞体外侵袭实验效果是一样的,两组迁移的细胞数很接近。在实验时间上，用NIH3
T3细胞制备趋化因子做细胞体外侵袭实验周期为1
周,而用胎牛血清作趋化因子做细胞体外侵袭实验周期为2
d
,实验时间节省了很多。因此认为可以用胎牛血清来代替NIH3T3
细胞制备的趋化因子。
2.
2
细胞的准备
所需细胞应处在对数生长期,细胞活力需大于95
%。如果细胞活力小,就会造成细胞穿透能力下降,影响实验结果。
2.
3
擦去Matrigel
凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞
先用干棉签将上室内液体吸去,再用蒸馏水浸湿的棉签轻轻擦去Mat
rigel
凝胶和聚碳酯膜上表面的细胞,如果没有擦净聚碳酯膜上表面的细胞,在细胞计数时就会将没擦掉的细胞也计进来。尤其是细胞为圆形的时候,就会分辨不出是穿过去的细胞还是没穿过去的细胞,对于长梭形细胞来说,穿过去的细胞为长梭形,没穿过去的细胞多为圆形。
2.
4
苏木素染色
上室浸泡在新苏木素中的时间为1
min
,用过多次的苏木素为2
min。在研究粉防己碱对HUVEC
人类脐静脉内皮细胞迁移能力的抑制作用没有将多余苏木素洗去,直接脱水、透明,造成细胞图片背景模糊,细胞不清楚(见图1)
。在作不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810
胆囊癌细胞体外侵袭能力的强弱实验时我们将其置于盛有自来水的烧杯中,反复漂洗几次,将多余苏木素洗去再行脱水、透明;这样做出的细胞图片背景干净,细胞清楚(见图2)
。

Ⅳ 胶原酶和胰酶在细胞原代培养中的区别

胶原酶在上皮类细胞原代培养时经常使用，作用对象是胶原组织，因此不容易对细胞产生损伤。消化原代培养的上皮类细胞用此酶效果更好。

胰蛋白酶（简称胰酶）是广泛应用的消化剂.胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不同,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等.

胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,最终浓度200u/mL或0.0.3mg/mL.此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本.

Ⅵ 鼠尾胶原蛋白为什么不凝固

缺少蛋白酶。鼠尾胶原蛋白然培养基和一种天然的黏附剂，其中不凝固的原因是缺少蛋白酶，胶原蛋白是生物高迹老唯含槐分子姿培，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白。

Ⅶ 胶原蛋白粉的每次使用量是多少

蛋白粉成人用量为0.8g/KG

折算下来，一个50KG的年人，每天可以食用40g的蛋白质

如果是胶原蛋白的话，那么你需要先清楚，你吃的是不是胶原蛋白（看氨基酸成分），我每天只使用了3克，48天皱纹就缓解了。

抬头纹明显缓解咯。

提示：胶原蛋白，有没有效果，看氨基酸组成。

Ⅷ 鼠尾胶原蛋白I型，用那一种胶原酶可以溶解

醋酸就可以.

1．将胶原加入到0.1M 的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。

2．建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。

3．稀释一定数量的胶原溶液。

4．按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。

5．从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的，这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。 在接种细胞前用无菌的水漂洗。