i型胶原纤维用什么溶解

‘壹’ 胶原蛋白1-3型和2型有何区别

一、存在位置不同

1、胶原蛋白1型：主要存在于成人皮肤、肌腱、骨组织。

2、胶原蛋白2型：主要存在于婴儿皮肤或血管内膜、肠道。

3、胶原蛋白3型：主要存在软骨、玻璃体、椎间盘等。

二、特点不同

1、胶原蛋白1型：I型胶原蛋白是相对坚硬的胶原蛋白，并呈现有鱼种的特异性。

2、胶原蛋白2型：II型胶原蛋白独特的高分子长链纤维结构使它在体内能形成胶原蛋白网络，并吸附各种蛋白多糖聚合物最终为组织提供抗拉张强度。

3、胶原蛋白3型：III型胶原不成熟、不稳定，弹性张力较低；III型胶原蛋白是具有弹性的胶原蛋白。

三、作用不同

1、胶原蛋白1型：胶原蛋白Ⅰ型较粗大，用于支撑皮肤硬度，使皮肤坚固。但是如果含量过多，则会使皮肤僵硬，创伤愈合后，也容易形成疤痕。

2、胶原蛋白2型：与皮肤损伤修复过程和修复质量紧密相关。

3、胶原蛋白3型：胶原蛋白III型较细小，用于支撑皮肤柔嫩度，使皮肤细腻和富有弹性。含量越高，越能使皮肤细腻柔嫩，创伤后III型胶原蛋白可以更好地让伤口恢复，不容易留疤痕。

‘贰’ 胶原蛋白是液体比较好，还是颗粒药丸还是粉

20岁不必每天都吃，因为体内胶原蛋白还不会过量流失。 要吃也吃粉剂，液体和胶囊都不要考虑。 胶囊含量低，液体添加物过多价格贵。 粉末找国产的就可以，关注一下厂家的资质，有无QS认证等等，同时关注相关的胶原蛋白氨基酸检测报告和分子检测报告。 氨基酸含量百分之99.5以上，分子量在1000-3000道尔顿的多肽是最好被人体肠道吸收的口服胶原蛋白。

‘叁’ 胶原蛋白分为哪几类

胶原蛋白是一类蛋白质家族，已至少发现了30余种胶原蛋白链的编码基因，可以形成16种以上的胶原蛋白 分子。

根据其结构可分为纤维胶原、基底膜胶原、微纤维胶原、锚定胶原、六角网状胶原、非纤维胶原、跨膜胶原等。

根据胶原在体内的分布和功能，胶原可分为间质胶原、基底膜胶原和细胞周围胶原。

类型的间质胶原蛋白分子身体大部分的胶原蛋白,包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白分子,Ⅰ型胶原蛋白主要分布在皮肤,肌腱,和水产品加工废弃物(皮肤、骨骼和大小),其中一个最丰富的蛋白质占80 - 90%的总胶原蛋白含量,使用最广泛的药物。

Ⅰ型胶原在鱼类胶原蛋白,最引人注目的一个特点是热稳定性较低,还有物种特异性。Ⅱ型胶原蛋白由软骨细胞产生;基底膜胶原类型,通常被称为Ⅳ胶原蛋白,它主要分布在基底膜;周细胞外胶原蛋白通常Ⅴ中指类型胶原蛋白,在结缔组织比比皆是。

根据胶原蛋白的功能可以分为两组,第一组胶原纤维,包括第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,Ⅺ,ⅩⅩⅣ,ⅩⅩⅦ胶原蛋白类型;其余是第二组，非纤维性胶原蛋白。非成纤维胶原的-链同时包含三个螺旋结构域(COL)和非三螺旋结构域(NC)，其中成纤维胶原约占胶原总量的90%。

(3)i型胶原纤维用什么溶解扩展阅读：

胶原蛋白相容性：

生物相容性是指胶原蛋白与宿主细胞和组织之间良好的相互作用。胶原本身是细胞外基质的骨架，其三股螺旋结构和交联形成的纤维或网络可以锚定和支持细胞，为细胞增殖和生长提供适宜的微环境。

作为新组织的框架被吸收之前,作为一个主机的一部分被吸收和融入主机后,他们有良好的与细胞周围的基质相互作用,相互影响、协调和参与细胞的正常生理功能和组织作为一个整体。

如海绵状I型胶原与兔脂肪干细胞具有良好的体外生物相容性，可为组织工程种子细胞的生长提供适宜的三维空间，可作为组织工程种子细胞的载体材料。

胶原蛋白可降解性：

胶原蛋白可被特定的蛋白酶生物降解。由于胶原蛋白具有紧密而牢固的螺旋结构，大多数蛋白酶只能切断其侧链，只有胶原酶、弹性酶等特异性蛋白酶才能在特定条件下降解胶原蛋白，破坏胶原肽键。

胶原蛋白肽键一旦断裂，其螺旋结构就会被破坏，完全水解成小分子多肽或氨基酸，进入血液循环系统，被机体再利用或代谢。生物降解性是利用胶原蛋白作为器官移植材料的基础。

‘肆’ 又名白纤维的纤维是

白纤维是胶原纤维。

胶原纤维是真皮中的主要成分，占真皮全部纤维质量的95%-98%。新鲜的胶原纤维呈白色，故又称白纤维。

胶原纤维在三种纤维中数量最多，在HE染色切片中呈嗜酸性，粗细不等，直径0.5~20um，呈波浪形，有分支并交织成网，胶原纤维的生化成分为I型胶原蛋白。

胶原蛋白由成纤维细胞分泌，于细胞外聚合成胶原原纤维，在再经少量黏合成胶原纤维。

(4)i型胶原纤维用什么溶解扩展阅读：

胶原纤维形成的基本过程如下：

1、细胞内合成前胶原蛋白分子

成纤维细胞摄取合成蛋白质所需的氨基酸，包括脯氨酸、赖氨酸和甘氨酸，在粗面内质网的核糖体上按照特定的胶原mRNA的碱基序列，合成前α-多肽链。

后者边合成边进入粗面内质网腔内，并在羟化酶的作用下，将肽链中的脯氨酸和赖氨酸羟化。经羟化后，三条前α-多肽链互相缠绕成绳索状的前胶原蛋白分子。

溶解状态的前胶原蛋白分子，两端未缠绕，呈球状构型，在粗面内质网腔内或转移到高尔基复合体内加入糖基后，分泌到细胞外。

2、原胶原蛋白分子的细胞外聚合

细胞外的前胶原蛋白分子，在肽内切酶的作用下，切去分子两端球状构形部分，形成原胶原蛋白分子。原胶原蛋白分子平行排列聚合成胶原原纤维。

聚合时，相互平行的相邻分子错开1／4分子长度，同一排的分子，首尾相对并保持一定距离，聚合成束，于是形成具有64nm周期横纹的胶原原纤维。聚合时，分子内、分子间的化学基因进行缩合、交联，增加原纤维的稳固性。若干胶原原纤维经糖蛋白粘合成粗细不等的胶原纤维。

‘伍’ 临床医学综合辅导：积雪草酸抑制HSCT6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达

【摘要】 目的：研究外源性TGFβ对肝星状细胞系（HSCT6）的激活作用，以及积雪草酸抑制HSCT6细胞Ⅰ型胶原蛋白合成的药理作用。 方法：用LDH和MTT实验测定积雪草酸对HSCT6细胞的细胞毒性和细胞增殖的影响。 检测HSCT6细胞受不同剂量和不同时间TGFβ刺激后表达Ⅰ型胶原蛋白的剂量和时间。 以不同剂量的积雪草酸作用于TGFβ活化的HSCT6细胞，提取细胞总蛋白，以Western Blot方法检测积雪草酸对TGFβ活化的HSCT6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。 结果：TGFβ刺激HSCT6细胞表尘败达Ⅰ型胶原蛋白的剂量为1 ng/mL，时间24 h. 10～30 μmol/L积雪草酸可以抑制TGFβ诱导的HSC细胞Ⅰ型胶原蛋白表达。 结论：外源性TGFβ可激活HSCT6细胞表达Ⅰ型胶原蛋白；积雪草酸抑制HSCT6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达。
【关键词】 积雪草酸； Ⅰ型胶原蛋白； HSCT6细胞； 转化生长因子β

0引言

传统中药积雪草具有促进伤口愈合和抑制瘢痕增生药效［1-2］。 新近的研究表明积雪草能够抑制瘢痕组织来源的成纤维细胞的增殖和纤维蛋白的合成［2］。 肝星状细胞在肝纤维化过程中起着至关重要的作用。 本研究以积雪草酸作用于SV40病毒大T抗原转化的肝星状细胞（HSCT6），研究积雪草酸对HSCT6细胞胶原蛋白合成的影响。

1材料和方法

1.1材料

积雪草酸（SIGMA， Cat： 546712）， 黄棕色粉末， 无臭， 味苦。 分子式为C48H78O5， 熔点325℃～330℃，不溶于水，溶搭饥于二甲亚砜（DMSO）， 储存液浓度20 mmol/L. TGF β1（R&D Systems， Cat 240B），储存液浓度10 mg/mL. HSCT6由纽约Mount Sinai医学院 Friedmen教授赠送，维持培养在低糖型DMEM（Invitrogen）培养基中，添加10 g/L青链霉素（Invitrogen）和100 mL/L胎牛血清（Hyclone）。 1×105细胞2.5 mL铺6孔培养板， 50 mL/L CO2， 37℃ 培养24 h，换含2 mL/L胎牛血清DMEM继续培养24 h. TGFβ剂量实验组分别加入0.1， 0.5， 1， 2， 5 ng/mL TGFβ，培养24 h后收取细胞蛋白；TGFβ时间实验中各组均同样加入1 ng/mL TGFβ，分别在0， 6， 1， 24， 48 h收取细胞蛋白；积雪草酸实验分别加积雪草酸 0， 5， 10， 20， 30 μmol/L，2 h后除空白对照孔外，各孔加1 ng/mL TGFβ，24 h后提取细胞蛋白。

1.2方法

1.2.1乳酸脱氢酶细胞毒性实验（LDH）派枝颤

LDH试剂盒购自SIGMA公司。 HSCT6细胞维持培养在100 mL/L胎牛血清、10 g/L青链霉素的DMEM中。 1×105 HSCT6铺96孔板，细胞连续性达70％，吸弃上清，无血清DMEM 200 μL 洗2次。 2 mL/L胎牛血清DMEM中加入积雪草酸或DMSO，浓度分别为2.5， 5， 10， 20， 30， 40， 60， 80 μmol/L，200 μL加入细胞培养孔， 20 g/L Triton100作阳性对照，2 g/L胎牛血清DMEM作阴性对照，每剂量组各为3孔，37℃，50 mL/L CO2培养24 h. 将每孔上清吸出置另一96孔板相应孔，2000 r/min， 5 min待测。 将原各孔中残余液体吸干净，加入含20 g/L Triton100的DMEM 200 μL， 37℃，50 mL/L CO2培养30 min，使细胞裂解，2000 r/min， 5 min. 按试剂盒操作说明检测上清中以及细胞内的LDH，以490 nm波长测定A值，LDH释放率=A上清/（A上清+A细胞内）×100%.

1.2.2细胞增殖活性实验（MTT）

HSCT6细胞培养方法以及积雪草酸处理浓度和对照组的设置均与LDH检测方法中描述的相同。 MTT检测试剂购自Promega公司。 加入MTT染液在37℃培养4 h， 加入溶解液室温过夜，测定A570 nm/A650 nm双波长的吸光度。

1.2.3蛋白质提取及定量用RIPA（10 g/L Nonidet P40， 1 g/L SDS， 1 mmol/L PMSF， 5 g/L sodium deoxycholate， 1 mmol/L sodium orthovanadate， 10 mmol/L sodium fluoride in PBS）

细胞蛋白裂解液250 μL，将6孔板每孔中的细胞蛋白收集至1.5 mL离心管管中，超声粉碎500 W， 3 s×6次，以4℃， 10 000 r/min离心10 min，收取上清。 细胞蛋白浓度测定按照BioRad Laboratories蛋白测定试剂盒（Cat5000113）说明书来操作。 用RIPA裂解液将蛋白调节为一致浓度后，加入等体积的2×SDS上样缓冲液（100 mmol/L Tris.HCl， 40 g/L SDS，200 g/L甘油，2 g/L bromophenol blue）。 100℃蛋白变性5 min备用。

1.2.4免疫印记40 mL/L积层胶，100 mL/L分离胶，总蛋白20 μg的样本，加样至100 mL/L SDSPAGE中电泳100 V，90 min. 然后将蛋白转移至PVDF膜，150 V，90 min. 转膜后TBST洗膜。 以50 mL/L脱脂奶粉TBST封闭液室温下封闭60 min；TBST洗膜。 加入适当浓度的一抗孵育，4℃轻摇过夜。 TBST洗膜：加入适当浓度的结合HRP的二抗（1∶10 000至1∶30 000）及HRPantibiotin二抗（1∶5000）孵育，室温下轻摇60 min. ECL或ECL plus显影1 min后，在暗室中进行曝光2 s~15 min.

2结果

2.1积雪草酸对HSCT6细胞毒性不同浓度组与正常对照组比较，LDH释放率在30 μmol/L以下时无显着差异。 40 μmol/L以上时有差异（F=5.21， P<0.05， 图1）。

2.2积雪草酸对HSCT6细胞的增殖不同浓度组与正常对照组比较，在30 μmol/L以下时，对细胞增殖无增加和抑制作用。 40 μmol/L以上时显着抑制细胞增殖（F=49.04， P<0.05，图2）。

2.3TGFβ增加HSCT6细胞I 型胶原蛋白表达的时间和剂量1 ng/mL TGFβ作用HSCT6细胞24 h，Ⅰ型胶原蛋白表达水平。 不同剂量TGFβ作用HSCT6细胞24 h，Ⅰ型胶原蛋白表达水平在1 ng/mL TGFβ组（图3A， B）。

2.4积雪草酸减少HSCT6细胞Ⅰ型胶原蛋白表达10～30 μmol/L的积雪草酸可以抑制TGFβ活化的HSCT6细胞的Ⅰ型胶原蛋白表达。 溶解积雪草酸（20 μmol/L）组的等体积DMSO无抑制活化的HSCT6细胞的Ⅰ型胶原蛋白表达作用（图4）。

3讨论

TGFβ是重要的致肝纤维化细胞因子之一。 当TGFβ刺激肝星状细胞时，肝星状细胞活化、转化为肌原成纤维细胞，分泌含有大量胶原蛋白的细胞外基质。 HSCT6细胞是经SV40大T抗原转化的大鼠肝星状细胞系，具有活化的肝星状细胞表型［3］。 为了确定HSCT6细胞是否能够接受外源性TGFβ刺激，产生胶原蛋白表达的变化，不同剂量的TGFβ作用于HSCT6细胞，免疫印记检测Ⅰ型胶原蛋白的结果显示1 ng/mL TGFβ诱导HSCT6细胞胶原蛋白表达含量为。 以1 ng/mL TGFβ作用HSCT6细胞，检测不同时间HSCT6细胞胶原蛋白表达含量，结果显示在24 h Ⅰ型胶原蛋白表达水平。 外源性TGFβ诱导HSCT6细胞胶原蛋白表达的剂量和时间测定结果表明TGFβ可以刺激HSCT6细胞高表达Ⅰ型胶原蛋白，HSCT6细胞系可作为筛选治疗肝纤维化药物的细胞模型。

抑制肝纤维化可以通过抑制肝星状细胞（HSC）的增殖，促进HSC细胞的凋亡，上调TGFβ/Smad信号途径中的负反馈信号Smad7，以及减少抑制性组织金属蛋白酶（TIMP）等多种途径实现抑制细胞外基质（ECM）过度增生［4-5］。 10~30 μmol/L积雪草酸作用于TGFβ激活的HSCT6细胞，可以有效抑制其Ⅰ型胶原蛋白表达水平。 在同样剂量范围内，积雪草酸对HSCT6细胞的增殖无显着抑制作用，同时也没有显着的细胞毒性作用。 本研究表明积雪草酸抑制活化的HSCT6细胞的Ⅰ型胶原蛋白表达与抑制HSCT6细胞的增殖和积雪草酸产生的细胞毒性作用无关。 在我们的研究中有数据显示10~20 μmol/L 积雪草酸无明显地促进HSCT6细胞凋亡作用，小于30 μmol/L积雪草酸对Ⅰ型胶原蛋白合成的抑制作用与积雪草酸诱导凋亡作用似乎无关。 积雪草酸抑制HSCT6细胞Ⅰ型胶原蛋白合成与Smad2/3和Smad7以及TIMP分子之间的关系需进一步研究。

【参考文献】［1］Maquart FX， Wegrowski Y. Triterpenes from Centella asiatica stimulate extracellular matrix accumulation in rat experimental wounds［J］。 Eur J Dermatol，1999，9（4）：289-296.

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［3］Silke Vogel， Roseann Piantedosi， Jorge Frank， et al. An immortalized rat liver stellate cell line （HSCT6）： A new cell model for the study of retinoid metabolism in vitro［J］。 J Lipid Res， 2000， 41： 882-893.

［4］Bioaller R，Brenner DA. Liver Fibrosis［J］。 J Clin Invest， 2005，115：209-218.

［5］Friedmen SL. Mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic implications［J］。 Nature Clin Prac Gastroenterol Hepatol，2004，1：98-105.

‘陆’ I型胶原蛋白可用什么溶剂溶解具体用量如何把握

这个不清楚，不过胶原蛋白对皮肤很好的，有很好的抗皱效果，现在像fancl、艾诗缇的产品成分中就含有了胶原蛋白，胶原蛋白不仅可以抗皱，还有着很好的美白、保湿效果，有需要的朋友可以到艾诗缇的官网看看啊。

‘柒’ 鼠尾胶原蛋白I型，用那一种胶原酶可以溶解

醋酸就可以.

1．将胶原加入到0.1M 的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。

2．建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。

3．稀释一定数量的胶原溶液。

4．按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。

5．从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的，这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。 在接种细胞前用无菌的水漂洗。

‘捌’ 骨胶原蛋白详细资料大全

骨胶原蛋白（bone collagen）也称"骨胶原"，骨基质的90%由胶原组成。

基本介绍

• 中文名 ：骨胶原蛋白
• 性质 ：胶原蛋白
• 原料 ：真皮里的纤维细胞
• 原理 ：令纤维细胞变得不规则和发大

概述,稀酸处理,原料来源,合成,临床套用,

概述

一、骨胶原蛋白（bone collagen）也称"骨胶原"，骨基质的90%由胶原组成。Ⅰ型胶原构成骨胶原，骨Ⅰ型胶原，共3000多个胺基酸，分子量为95000，在化学结构上与结缔组织Ⅰ型胶原不同。骨Ⅰ型胶原的交联部位较少，交联是经过G醛基赖氨酸被氢硼酸钠还原后形成的结构。骨Ⅰ型胶原前N端扩展肽被磷酸化，而在结缔组织中则未发现翻译修饰后的前胶原。在胺基酸组成上骨胶原也不同于软骨胶原，它含有两种特殊胺基酸，即丝氨酸和甘氨酸，大量丝氨酸以磷酸丝氨酸盐的形式存在，故在矿化过程中磷酸盐与骨胶原的结合很重要。骨基质矿化过程中，羟基磷灰石与骨胶原相结合形成正常的骨质。骨的Ⅰ型胶原之间相互交联，形成骨基质框架；骨胶原的质量、数量也与矿化相关，保持一定的沉积比例。矿化过程还需有骨基质中的非胶原蛋白，即骨钙素、基质蛋白等的参与，Ⅰ型胶原不仅给骨钙素提供结构场所，还与骨钙素等非胶原蛋白相结合，形成网路支架，为骨矿化提供基本条件。，其他类型胶原如III型和V型胶原，在骨组织中含量较低，且其主要作用是辅助调节I型胶原的纤维直径。

稀酸处理

骨经稀酸处理后，除去无机成分的残留物，占人体蛋白质总量的30%～40%，分布在人体肌肉连线的肌腱、关节连线的软骨组织和结缔组织及皮肤的真皮层中。能促进钙、磷等无机质在骨骼上的沉积，因而能起到修复骨组织、改善骨质疏松症状、促进身体健康的作用。骨胶原也是组成人体肌肉、皮肤的重要成分，对于保持骨骼的韧性、人体运动的协调性及皮肤的弹性有很重要的作用。

原料来源

骨胶原蛋白基本采用药用明胶为原料。骨胶原蛋白中富含弹力蛋白，对于改善皮肤松弛，延缓衰老的效果会更明显。因此无论从工艺还是效果上，纯骨胶原蛋白更适合为人体吸收。

合成

骨胶原分子主要是由成骨细胞合成，软骨细胞也可合成，同时还合成和分泌一些非胶原性蛋白。骨胶原不能被稀酸或中性盐溶液所溶解。由于骨在正常状态下不断进行转换即重建，胶原也不断裂解，其降解产物一方面被移除，一方面又进行合成。

临床套用

骨是一种具有独特结构高密度的结缔组织，在胶原的有序排列基础上矿化，以提供人体的机械支持功能。骨胶原的合成减少及胶原纤维的排列不足是造成骨矿化不足的基础。骨小梁的基质主要由矿物质和胶原纤维丝构成，在正常的骨小梁上，70%～80%的部位有新的胶原纤维丝形成；而骨质疏松时，穿孔的骨小梁上仅有不足20%的部位上有新的胶原纤维形成，这种胶原的病损和骨矿物质含量的减少造成了骨小梁本身性能的变化。骨中HYP含量能直接反映骨代谢情况，其敏感性、特异性、稳定性均高于以往骨生化指标，对早期诊断骨质疏松、判断药物疗效及机制、预测骨折危险性具有重要价值。研究证实是由于骨胶原合成减少、分解代谢增强，给无机质矿化提供框架的机械支持功能降低，即使有足够的钙盐也无法沉积矿化。治疗应在增加骨胶原含量的基础上，适当补钙，使得补充的钙盐有沉积矿化的基础。雌激素和降钙素治疗骨质疏松，能使骨胶原含量增高，增强骨矿化，使骨的抗压缩抗折弯能力增强，脆性降低，韧性增强。

‘玖’ 什么物质可以溶解胶原纤维

由于胶原蛋白的特殊分子结构: Gly-Pro-X or Gly-X-Hyp. X为其他氨基酸，酶解胶原纤维最好使用胶原酶（Collagenase）。

根据特异性不同，胶原酶可分为胶原酶I, II, III, IV 和 V型。

当然，胶原纤维是蛋白质，可以用强酸非特异性水解。

‘拾’ 正在做细胞的三维培养，用的是BD公司的I型胶原和matrix gel胶，但怎么不凝啊

博凌科为解答：没有用过BD公司的胶原，但使用过Sigma的I型胶原(固体)，一般是自己配制成液态，然后根据需要按一定比例添加10x浓缩培养基及血清(保证 细胞的营养)，用1M浓度的NaOH调节pH值约7.2，再和细胞混合均匀后添加到培养器皿中，直接放到37度培养箱，一般也就是30分钟左右即可凝固， 等完全凝固后，再在其上添加培养基。胶凝固后，由于其内添加了培养基，所以一般是粉色的。另外，你在添加NaOH及培养基后，测没测过胶原的pH值？再者会不会在胶原中添加培养基量太多？培养基占的比例大，也会影响到胶原凝固。