鼠尾胶原怎么包被培养板

⑴ 复苏的细胞为什么不贴壁

齐氏生物认为复苏细胞是否贴壁跟你冻存时的操作有直接关系。而且细胞的传代数越多，即细胞越老，越禁不起低温的折腾。复苏后，细胞有个休眠期，大约7-14天不等。只要不死，你就慢慢养着。突破了某个时间点，你会发现细胞又神奇的康复了。但要等到细胞状态良好，传2代以上再做实验。尤其是流式、RNA干扰之类的。
细胞不好贴壁，细胞生物学专家CHI
scientific
建议您尝试以下6点：
复苏后洗涤一下,毕竟DMSO影响细胞的生长。
最好用塑料瓶培养,如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶,或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻,效果应该还可以，或者涂
fibronectin/collagen
/BSA，也可以帮助细胞贴附

还有就是你的冻存的细胞是否是完全死了,如果是的话是不可能贴壁的,因此在复苏后我建议你用台盼兰染色看一下死细胞和活细胞的数目及比例.

4.换液时间延长，尽量不要用力摇动。
5.尽量缩短复苏时间
6.操作的环境温度最好不要变动太多。

希望能帮到你！

⑵ 求助原代肝细胞培养问题

原代肝细胞很容易贴壁生长,4小时肯定能贴壁.
“然后就有浑浊的沉淀,那个沉淀是肝细胞吧?”将此沉淀用培养液或pbs稀释,加台盘蓝染色,显微镜下观察,若为活细胞,通常就是肝细胞了,要培养好,最好有大于85%以上的活性.
原代肝细胞最好生长在鼠尾胶原上,也就是用鼠尾胶原铺板,然后再普细胞.
4小时后换液,然后每20小时左右换液,通常原代肝细胞难以增值,但是维持20天左右没问题.

⑶ transwell共培养的小室膜上要铺胶不呢我用0.4um的孔径，铺什么胶呢

细胞迁移实验步骤（Neuroprobe的使用方法）

1．膜预处理
将48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾胶原置于50ml的离心管。在膜的粗糙面用铅笔做标记，放入上述溶液中4度过夜。
实验前将膜取出，放入装有PBS的培养皿中漂洗一遍，再用饥饿培养基洗一遍，吸去培养基后加入新的饥饿培养基，放入37度培养箱中。
2. 处理细胞
将细胞消化，调浓度1×105个/ml，细胞迁移装置下层加入166μl含有刺激因子的饥饿培养基。小心铺好膜（粗面朝下），装好塑料垫，固定上层装置。上层加入100μl细胞悬液，迁移4-6h。
3. 固定
小心将膜取下来，在用PBS弄湿的滤纸上挂掉光滑面的细胞，在新的滤纸上粗面朝唤洞上放置，彻底晾干。然后再甲醇里粗面态链册朝上固定5min，彻底晾干。
4. 染色
粗面朝下置于结晶紫染液中30min，取出膜用双蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在载玻片上，数细胞。
这个方法比transwell方便。与boyden chemper法类似。

Transwell法的步骤：
先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜。如新的小室省略此步。下一步将小室倒扣并小室的底部外侧滴加0.1%（还是1%记不清了）的明胶室温放置20-30分钟。这是将细胞消化下来，调浓度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培养基。小室上还未干的明胶甩掉，加细胞放入24孔板里。放入细胞培养箱培养4-6小室。拿出小室甩掉里边的培养基。小心擦尽小室里边的细胞（不能碰外边）。将小室放入装有600ml结晶紫的24孔板染色帆宏1小时。移到空的24孔板后即可在显微镜下观察了。

⑷ 养细胞用过的装明胶(1%gelatin)的玻璃瓶如何清洗

博凌科为解答：泡酸清洗即可。注意酸液残留，多用自来水、超纯水冲几遍明胶和胶原，都带正电荷，辅助细胞贴壁。胶原更好！鼠尾胶原（collegen）：常用的包被培养皿的基质。1、75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2、将尾巴剪开、去掉皮毛，并剪成小段，抽出银色的尾键；3、把剪碎的尾键置于150ml，0.1％消过毒的醋酸中，4℃放置，并不时振荡；4、48h后取上清，4000转离心30min后，取上清；分装上清（鼠尾胶）4度保存。有时可继续向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重复以上步骤，以制备更多的鼠尾胶。0.1%的醋酸（冰醋酸）应是g/L,和0.9%盐水所指的一样，查过冰醋酸的密度是1.04,分析纯的冰醋酸的浓度应大于99.5%,因此配制时 基本可以用1ml溶于1L双蒸水中得到0.1%的醋酸。置于盐水瓶中10磅10～15分钟即可，消毒时（包括其它液体消毒），觉得在瓶口与胶塞中放一根棉 绳，消毒完后（必须基本冷却后再打开压力锅，否则胶塞会炸出）扯出棉绳，这种方法最好由于胶原液不能过滤也不能高压灭菌，所心制取胶原过程当中注意无菌操作，在使用时待凝胶后。放在紫外线下照射过夜，第二天便可使用。

⑸ 复苏的细胞为什么不贴壁

刚复苏的细胞有时所需时间长且贴壁不牢。细胞冷冻后复苏时，都有不同程度的肿胀，若以50ml培养瓶待细胞长满瓶底的70%～80%时消化冻存。

特别是培养表面上的电荷密度影响较大。血清中的冷析蛋白和纤维粘连蛋白可在培养表面与细胞间架桥，有利于加快细胞贴附速率。细胞扒早在培养表面上的铺展除了与以上因素有关外，还与表面情况特别是光滑度有关。

(5)鼠尾胶原怎么包被培养板扩展阅读

一般来说，细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成，即单细胞生物，高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类，但也有人提出应分为三类，即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。

细胞体形极微，在显微镜下始能窥见，形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成，表面有细胞膜。高等植物细胞膜外激山有细胞壁，细胞质中常有质体，体内有叶绿体和液泡，还有线粒体。动物细胞无细胞壁，细胞质中常有中心体，而高等植物细胞中则无。细胞明此中有运动、营养和繁殖等机能。

⑹ 如何用明胶包被细胞培养板

这是由细胞的性质特点决定的。 有些细胞是必须要附着在支持物上才可以生长的，比如肝细胞，胃上皮细胞等等。 而有些细胞可以悬浮生长，比如骨髓细胞白，血病细胞等等。 这些细胞的生长都是需要添加血清的，而不咐链是有些人说的，加入血清后会贴壁。
Q1.明胶溶液配置的问题
A1: 用去离子水来配友友即可。国产的行不行要去试验，保险的就是买进口的。其实通常是买Sigma的gelatin粉末来配就好了，不用买配好现成的。配好的浓缩 液可分装放-20度长期保存，即将要用的浓缩液可放4度来备用。
Q2.明胶使用浓度的问题
A2:1%是浓缩母液的浓度，使用前才取适量稀释成0.1%来包被。
Q3.明胶消毒的问题:
A3: Gelatin是用高温高压杀菌的， 其他你所说的方法也不是不能用， 只是没必要。
Q4.明胶包被培养瓶的问题
A4:通常是包被1小时就够了，然后吸乾，不需要清洗。因为你配gelatin溶液中并没有含其他有害的物质， 冲洗只是多了一道没必要的工作。包被完要清洗是Collagen才需要的。
Q5.明胶包被后的培养瓶使用期的问题
A5.这个我不知道，但基本上是越快使用越好。由于包被的过程很快，所以我都是当天包被， 在等的过程中可以去做其他的事，包被即将完成的前20分钟就开始处理细胞，等细胞收下来包被也就做好了， 马上就用。 0.1%的明胶适合大多数细胞培养时的包被，在四度放置不会出现凝胶状。我参考的文献说内皮细胞用1％的明胶包被，也就是母液，它在四度放置时会适度凝 结。我的内皮细胞用1％的明胶包被效果我觉得还不错。不管你用包被1小时的方法还是包被4小时的方法，都最好从包被衡告孙开始到使用的间隔不超过一天，包被的容器放置时间越长越不好。

⑺ 鼠尾胶原蛋白为什么不凝固

缺少蛋白酶。鼠尾胶原蛋白然培养基和一种天然的黏附剂，其中不凝固的原因是缺少蛋白酶，胶原蛋白是生物高迹老唯含槐分子姿培，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白。

⑻ 铺上鼠尾胶原可以照紫外光吗

铺上鼠尾胶原可以照紫兆哪渣外光。紫外光具有消毒杀菌的作用，而鼠尾胶具有大量细菌，使用之前需要消毒杀菌。所以缓游铺上鼠族悄尾胶原可以照紫外光。

⑼ 胚胎干细胞培养是如何培养的它的具体操作过程饲养层细胞是成纤维细胞，那它的详细作用是什麽

【推荐】胚胎干细胞培养标准化操作规程胚胎干细胞培养标准化操作规程 6/28/01

目录漏烂

一、细胞

二、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态
培养基
细胞复苏
冻存细胞
明胶包被
细胞传代

三、体外分化
培养基
包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）
体外分化方法

四、移植细胞的准备

细胞

多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡
1．表达绿色荧光蛋白（EGFP）的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。
2．D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。
3．J1-由Dr. Jaenish的实验室友情提供。我们得到时大约传了7－9代。
4．J1rtTA-rtTA表达J1细胞，由Dr. Jaenish的实验室友情提供。
5．表达黄色荧光蛋白的YC5-ES细胞，由Dr. Nagy的实验室提供。

一般培养--维持ES细胞处于未分化状态
ES细胞培养用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培养基来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。

培养基
ES:
配制一20×不含DMEM，HS，ESGRO的溶液（该溶液也能用于EB培养基--见下文）。分装在50ml FALCON管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。通过将21ml该溶液，HS和ESGRO加入450mlDMEM中制备培养基，0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。 注：一瓶DMEM是500ml。

贮存液
DMEM(高糖)
马血清（HS）
L-谷氨酰胺（200mM）
MEM NEAA（10mM）
HEPES（1M）
β-巯基乙醇（55Mm）
PEST
ESGRO

复苏细胞
细胞被冻存在10％二甲基亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。然而，二甲基亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。

步骤：
1．从液氮中取出一管细胞；
2．将冻存管置于37℃水浴中2分钟（或放到管内溶液恰好完全溶解）；
3．将细胞转移到一15ml Falcon管中；
4．加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）；
5．离心3分钟；
6．弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次；
7．接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿；
8．孵育。

冻存细胞返顷漏
冻存液
90％HS和10％二甲基亚砜

步骤：
1．1×PBS洗细胞并留少许PBS在培养皿内；
2．用细胞刮刀收集细胞；
3．将细胞转入15ml Falcon管内并离心3分钟；
4．弃去上清并将细胞重悬于冷的冻存液中（10cm的培养皿用2ml，15cm的培养皿用6－7ml。）
5．分装于冻存管内，每管1ml；
6．置－80℃过夜，第二天移入液氮。

明胶包被
准备500ml 0.1％明胶溶液
1．将0.5g明胶溶解在500ml无钙镁的PBS中（50－65℃水浴15～30分钟）。
2．最好在溶液没有冷却的情况下通过0.2μm滤膜过滤，贮存在4℃。
包被培养板或培养皿
1．加入足量的明胶溶液覆盖培养平面（15cm培养皿加乎明2ml，10cm培养皿加0.5～1ml，溶液的量并不重要，只要能完全覆盖培养表面就行了。）；
2．置室温30分钟；
3．去除明胶溶液，将培养板贮存在包装袋中室温放置，最好将板子平方，以免明胶污染盖子和流出培养板。

细胞传代
建议每2－3天传代细胞一次，过度生长的细胞会降低细胞的自然分化率，我们建立了一种纯化方法来去除分化细胞，在将细胞接种在明胶包被的培养板上之前，通过将分化细胞黏附在没有包被的组织培养板上去除分化细胞。纯化步骤包含在下面的方法中。

1．去除培养液；
2．1×无钙镁PBS洗涤；
3．加入1×胰酶EDTA(10×胰酶EDTA用PBS稀释。)37℃孵育5分钟。
4．加入ES培养基使胰酶失活；
5．将细胞转入15ml离心管中离心3min；
6．去除上清，将细胞重悬于2mlES培养基，至少吹打10－20次。
如果加入培养基的量较少会比较容易将细胞团弄散分开。ES细胞有聚集成团的倾向，传代过程中仔细将细胞弄散分开很重要。这样可能会减少细胞的自然分化。
7．将细胞接种在没有包被的组织培养皿中（使用和一开始同样规格的培养皿）放入温箱2小时（分化细胞在该时间内将黏附，而ES细胞仍将保持悬浮）；
8．将含有细胞的培养基转入明胶包被（见下文）的组织培养皿。吹打以确保细胞被分散开（前面已经提到--ES细胞有聚集成团的倾向）
9．建议按1：4－1：10的比率传代(ATCC)
保持细胞的传代比率很重要，以我们的经验，1：8的比率是好的，可以使细胞的自然分化降到最低。当你使用不同规格的培养板进行细胞传代可以使用表1来计算传代比率。

体外分化
多能胚胎干细胞在体内外可以分化为各种类型的细胞。我们的体外分化方法有利于神经前体细胞通过在最少量的培养基内选择（第3步），在有bFGF存在的情况下扩增（第4步）并最终分化在第5步。细胞全程培养在37℃，5％CO2，100％湿度条件下。
时间线（总时间为27～34天）
第2步；4＋1天 第3步；4－10天 第4步；4天 第5步；10－15天

培养基
EB
配制一20×不含DMEM，FBS，ESGRO的溶液（该溶液也能用于ES培养基--见前述）。分装在50ml FALCON管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。将21ml该溶液和50ml FBS加入450mlDMEM中制备培养基，0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。 注：一瓶DMEM是500ml。
贮存液
DMEM(高糖)
胎牛血清
L-谷氨酰胺（200mM）
MEM NEAA（10mM）
HEPES（1M）
β-巯基乙醇（55Mm）
PEST（P104U/mlS104μg/ml

ITSFn and N3：
配制一20×不含DMEM/F12的溶液。分装在15ml FALCON管中，（稀释为1×，ITSFn 7.05ml，N3 12.55ml），0.2μm滤膜过滤，贮存在-20℃。将该溶液加入DMEM/F12中制备培养基，贮存于4℃。
贮存液
DMEM(高糖)
转铁蛋白50mg/ml
胰岛素5mg/ml
亚硒酸钠300μM
黄体酮（20μM）
腐胺（100μM）
PEST（P104U/ml S104μg/ml）
层粘连蛋白100μg/ml
纤维连接蛋白250μg/ml
碱性rhFGF, 10μg/ml
*在第4步将bFGF加入N3培养基使终浓度为10ng/ml。

ITSFn and N3培养基贮存液的准备
使用无菌的溶剂和稀释液，在分装之前要对溶液进行过滤，如果因为某些原因溶液在分装之前没有进行过滤，需要在管子上标明以便别人在使用时知道该溶液不能直接用于细胞培养。
贮存液 溶剂，贮存液，稀释剂和储存
转铁蛋白50mg/ml
胰岛素5mg/ml
亚硒酸钠300μM
黄体酮（20μM）
腐胺（100μM）
PEST（P104U/ml S104μg/ml）
层粘连蛋白（100μg/ml）
纤维连接蛋白（250μg/ml ）
碱性rhFGF, （10μg/ml）

包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）

包被液的准备
多聚-L-鸟氨酸，15μg/ml
把75ml多聚-L-鸟氨酸和425ml 1×PBS混合。贮存在4℃。
纤维结合蛋白，1μg/ml
把0.5ml纤维结合蛋白和500ml 1×PBS混合。

包被过程：
1．加入多聚-L-鸟氨酸，至少2－3小时（过夜也行）
2．吸出多聚-L-鸟氨酸
3．加入纤维结合蛋白，大约1－2小时
4．吸出纤维结合蛋白，放置30分钟晾干
5．贮存在4℃
24孔板用200μl，6孔板用500μl。震荡培养板确保溶液能够覆盖盖玻片或培养孔。有时需要剧烈震荡培养板。

体外分化方法

第1步：ES培养基
在LIF（ESGRO）存在的条件下维持细胞培养

第2步：EB培养基
使用细菌培养皿去除LIF后胚状体的形成需要4天。
1．分散纯化细胞（参见上面的细胞传代部分）
2．纯化2小时后将细胞转入含有ES培养基的50ml Falcon管中，计数细胞取适量体积放入15ml管中离心3分钟。
3．用2mlEB培养基重悬细胞，吹打至少10次制成单细胞悬液
4．一个15cm的细菌培养皿接种4～5×106个细胞（1个完全融合的组织培养皿通常足以接种4个同样规格的细菌培养皿）。
5．2天后更换培养基
将胚状体转入锥形管中放置3～5分钟使细胞沉降。弃去上清，将细胞重悬于新鲜培养基并接种在新的细菌培养皿中。
6．用EB培养基培养的第4天将细胞转入没有包被的组织培养皿中（这即是细胞的移植步骤）。1个组织培养皿之中放置1个细菌培养皿，在进行第3步之前一天将胚状体黏附在同样规格的培养板上。
形成胚状体需要4天时间。在EB培养基中再培养1天使胚状体粘附在组织培养皿的表面。这一天被认为是第2步和第3步的分界。

第3步--ITSFn培养基
在最少量培养基中选择神经前体细胞
1．在胚状体接种在组织培养皿一天后将培养基换成ITSFn培养基
2．并非所有胚状体在这一时期都已经发生粘附，因此在移除培养基时要小心谨慎以使大部分胚状体留在培养皿内。
3．保持细胞在ITSFn中培养大约10天，根据需要更换培养基--大约每隔一天。
观察细胞形态，神经样细胞大约出现在第4到第7天。当神经样细胞能够被鉴别时，转入到第4步。步骤的转换应该在神经前体细胞出现第一个清晰的标志几天以后，通常是在第3步的第6到第10天。

第4步－N3培养基＋bFGF
通过将神经前体细胞培养在含有10ng/ml bFGF的培养基中进行扩增。
1.PBS洗涤，加入2ml 1×胰酶（1个15cm的培养皿所需胰酶的量根据前文表中的体积）（10×胰酶EDTA用PBS稀释）
2．37℃孵育5分钟
3．用4mlEB培养基终止胰酶活性，将细胞转入锥形管中放置3～5分钟移出细胞团，将上清移入一新的离心管离心。
4．将细胞重悬于含有bFGF的N3培养基。
5．将细胞接种在包被多聚-L-鸟氨酸/纤维连接蛋白的盖玻片上（最好将盖玻片放于24孔培养板或6孔培养板，6孔培养板中每孔放置5个盖玻片如果是塑料的放置4个，以使最大可能的获得样品数量）。24孔板接种3.5×105/孔或6孔板1.7×106/孔。
6．2天后更换培养基

第5步－N3培养基
通过撤除bFGF使神经前体细胞分化
1．细胞被接种在盖玻片上4天后将培养基换成不含bFGF的N3培养基
2．根据需要换液（大约每隔一天）
3．分化10～15天后固定细胞
移除培养基
PBS洗涤
加入4%福尔马林
室温放置30分钟
PBS洗涤2次
储存于PBS。长期储存使用含0.01％叠氮化纳的PBS
移植细胞的准备
细胞在胚状体形成4天以后被移植（相应于体外分化过程中的第2步末细胞被转种到组织培养板）。正如在前文体外分化中所描述的在移植之前4天开始形成胚状体。通常再需要一天时间以便将胚状体移植入一10cm的培养皿。

移植
1．将胚状体转移至一15ml 圆锥形管中放置3～5分钟使胚状体沉降下来。
细胞被离心3分钟会更好。放置使之沉降将会去除更多的单个细胞（包括死细胞）而这些细胞可以被离心下来。
2．去除上清将胚状体重悬于无钙镁离子的1×PBS中
3．离心3分钟
4．去除上清加入1×胰酶（10cm的培养皿加1ml）
5．37℃水浴5分钟
6．加入5mlEB培养基小心吹打约10次
小心处理细胞很重要，进行细胞传代分散细胞时不可剧烈吹打。
7．离心2分钟
8．吸出上清将细胞重悬于500μl EB培养基
9．用光滑的巴斯德吸管小心吹打5次
10．离心2次
11．吸出上清将细胞重悬于100μl EB培养基

烟酸己可碱标记ES细胞进行移植
1．准备一10μg/ml的烟酸已可碱染液（双苯酰亚胺，在冷冻室118）
2．加入1mg（你能称到的最小量）到5ml EB培养基（制成200μg/ml）
3．将溶液稀释成10μg/ml （100μl 200μg/ml 溶液和1.9ml EB培养基）
4．如前所述将细胞重悬于2ml烟酸已可碱染液而不是EB培养基中制备ES细胞悬液，
5．将悬液置于室温（或冰上）30分钟
6．离心2分钟
7．吸出上清将细胞重悬于2ml EB培养基
8．重复一次
9．离心2分钟
10．吸出上清将细胞重悬于100μl EB培养基并置于冰上。 这是我最近翻译的一篇有关胚胎干细胞的文章，译的不好，但是意思应该还算准确。不好意思，有两个表格没有发上，哪位老师告诉我该如何编辑表格。谢谢了！ 谢谢，顶！ 我也顶 很好的帖子哦!我查了好久终于找到了.万分感谢! 谢谢，现在还没用到，就当先了解一下好了。再次谢谢！ 谢谢非常感谢 有原文吗？
如果有可以发到我邮箱（[email protected]）吗？谢谢！！ 好贴！

能将英文原文贴上吗？或者发到我的信箱：[email protected]

谢谢！ 不错不错，我这里发一些关于干细胞的相关知识
干细胞的概念
干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。它包括胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞的发育受多种内在机制和微环境因素的影响。目前人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。最新研究发现，成体干细胞可以横向分化为其他类型的细胞和组织，为干细胞的广泛应用提供了基础。
在胚胎的发生发育中，单个受精卵可以分裂发育为多细胞的组织或器官。在成年动物中，正常的生理代谢或病理损伤也会引起组织或器官的修复再生。胚胎的分化形成和成年组织的再生是干细胞进一步分化的结果。胚胎干细胞是全能的，具有分化为几乎全部组织和器官的能力。而成年组织或器官内的干细胞一般认为具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织。
然而，这个观点目前受到了挑战。
最新的研究表明，组织特异性干细胞同样具有分化成其他细胞或组织的潜能，这为干细胞的应用开创了更广泛的空间。
干细胞具有自我更新能力（Self-renewing），能够产生高度分化的功能细胞。干细胞按照生存阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞 。
1.1 胚胎干细胞
胚胎干细胞（Embryonic Stem cell， ES细胞）
当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团（Inner Cell Mass）的细胞即为胚胎干细胞。胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。早在1970年Martin Evans已从小鼠中分离出胚胎干细胞并在体外进行培养。而人的胚胎干细胞的体外培养直到最近才获得成功。

进一步说，胚胎干细胞（ES细胞）是一种高度未分化细胞。它具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。研究和利用ES细胞是当前生物工程领域的核心问题之一。ES细胞的研究可追溯到上世纪五十年代，由于畸胎瘤干细胞（EC细胞）的发现开始了ES细胞的生物学研究历程。
目前许多研究工作都是以小鼠ES细胞为研究对象展开的，如：德美医学小组在去年成功的向试验鼠体内移植了由ES细胞培养出的神经胶质细胞。此后，密苏里的研究人员通过鼠胚细胞移植技术，使瘫痪的猫恢复了部分肢体活动能力。随着ES细胞的研究日益深入，生命科学家对人类ES细胞的了解迈入了一个新的阶段。在98年末，两个研究小组成功的培养出人类ES细胞，保持了ES细胞分化为各种体细胞的全能性。这样就使科学家利用人类ES细胞治疗各种疾病成为可能。然而，人类ES 细胞的研究工作引起了全世界范围内的很大争议，出于社会伦理学方面的原因，有些国家甚至明令禁止进行人类ES细胞研究。无论从基础研究角度来讲还是从临床应用方面来看，人类ES细胞带给人类的益处远远大于在伦理方面可能造成的负面影响，因此要求展开人类ES细胞研究的呼声也一浪高似一浪。
1.2 成体干细胞
成年动物的许多组织和器官，比如表皮和造血系统，具有修复和再生的能力。成体干细胞在其中起着关键的作用。在特定条件下，成体干细胞或者产生新的干细胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能细胞，从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。过去认为成体干细胞主要包括上皮干细胞和造血干细胞。最近研究表明，以往认为不能再生的神经组织仍然包含神经干细胞,说明成体干细胞普遍存在，问题是如何寻找和分离各种组织特异性干细胞。成体干细胞经常位于特定的微环境中。微环境中的间质细胞能够产生一系列生长因子或配体，与干细胞相互作用，控制干细胞的更新和分化。
1.3 造血干细
造血干细胞是体内各种血细胞的唯一来源，它主要存在于骨髓、外周血、脐带血中。今年年初，协和医大血液学研究所的庞文新又在肌肉组织中发现了具有造血潜能的干细胞。造血干细胞的移植是治疗血液系统疾病、先天性遗传疾病以及多发性和转移性恶性肿瘤疾病的最有效方法。

⑽ 鼠尾胶原蛋白I型，用那一种胶原酶可以溶解

醋酸就可以.

1．将胶原加入到0.1M 的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。

2．建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。

3．稀释一定数量的胶原溶液。

4．按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。

5．从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的，这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。 在接种细胞前用无菌的水漂洗。