⑴ 养小白鼠一个人最多能提取多少血清
0.3-0.6毫升左右禅粗。
血清携吵为身体提供营养物质、保护细胞以及促进细胞代谢，血辩袭侍清可为身体提供氨基酸、维生素以及脂类物质等细胞生长所必须的物质，血清还能保护细胞，使细胞贴壁避免受到机械损伤，血清中还存在抗蛋白酶成分，可与蛋白酶发生中和，小白鼠用途广范，市场需求高，小白鼠养殖成长快，易繁殖，所以最适合用于提取血清。
⑵ 如何高效补充胶原蛋白肽
一个成年人的身体内约有3公斤胶原蛋白，主要存在于人体皮肤、骨骼、眼睛、牙齿、肌腱、内脏（包括心、胃、肠、血管）等部位，其功能是维持皮肤和组织器官的形态和结构，也是修复各损伤组织的重要原料物质。
皮肤中的胶原蛋白占了身体总量的40%。真皮中含有大量胶原蛋白纤维，胶原蛋白的外号就是青春蛋白。
人体很神奇，为我们装进了那么多好东西，但岁月不饶人，很多东西岁月想带走都不跟你打声招呼。比如：胶原蛋白。
随着年龄增长和外源性因素伤害，胶原蛋白会被降解，皱纹就会逐步形成。
20岁胶原蛋白开始老化流失；
25岁胶原蛋白流失到了高峰期；
35岁开始了断崖式的流失；
45岁以后，身体里的胶原蛋白基本少得可怜了……
每一个数字都很扎心，特别是对于很注重面子的美女们，当我们了解了它流失的节点，重要的就是要提前做好准备，所以，你知道什么时候开始要抗衰了么？
当然，胶原蛋白的流失除了年龄，还有很多因素：比如身体的氧化、透支、环境伤害，以及生宝宝等等，可以说是雪上加霜啊，胶原蛋白就是这样悄悄地离开我们，直到有一天我们发现自己有了皱纹、有了法令纹、眼角也开始下垂，才意识到这是个大问题。
所以要改善衰老皮肤，必不可少的就是促进胶原蛋白合成，以及减少自由基的破坏。
常见的补充胶原蛋白4种方式：
1、食补：如猪蹄、蹄筋、鸡脚、鸡翅、鱼皮等含胶原蛋白，每天用10只猪蹄可补充皮肤所需胶原蛋白，但脂肪和热量又严重超标了；
2、护肤品：不同产品效果不一，部分高档护肤品含少量胶原蛋白，对皮肤有一定作用，但不能转换为自身的胶原蛋白；
3、注射：效果立竿见影，但价格昂贵，效果维持半年到两年，而且有一定风险；
4、专业营养品（胶原蛋白肽）：分子小，吸收效果好且持久，服用方法简单有效，是目前亚洲女性最喜爱的美容方法。
如果有下面图片所显示的这些状况，那说明：
补充胶原蛋白究竟是不是智商税？
来自不同国家地区、跨越了十多年的大量人体试验表明，口服胶原蛋白能够改善皮肤！能够促进真皮胶原蛋白合成，提升透明质酸（玻尿酸）含量，减少胶原蛋白分解……总之就是能改善皱纹和光老化、提升皮肤弹性和增加皮肤水分。
实验表明，食物中的胶原蛋白或胶原蛋白水解后的肽吸收进入血液，就会沉积在皮肤、跟腱等胶原蛋白含量丰富的部位。（这个研究是通过同位素示踪完成——就是在肽进入人体前是给它标记一个物质，这样肽进入体内吸收后，跑到哪里都能被检测到）
吃进去的胶原蛋白肽，可以促进成纤维细胞合成胶原蛋白和透明质酸，有利于改善真皮状况，能启动相关的基因，并且能抗氧化和启动细胞信号。
非常多的试验证据，例如其中一个是给小鼠照射紫外线，造成光损伤，再喂食胶原蛋白肽，小鼠的皮肤能明显好转、皱纹减轻。
20岁后，你流失的是胶原蛋白，要补的是胶原蛋白肽！
胶原蛋白肽是胶原蛋白的水解产物，是胶原蛋白的最小单元，无需分解即可被人体吸收和利用，低于5000Da（单位：道尔顿）均属于胶原蛋白肽。分子量以1000-3000道尔顿为宜（分子过低，胶原蛋白的合成率低；分子过高，吸收率低，味道也较腥）
目前一窝蜂出现的胶原蛋白食品、饮料及保养品，大多标榜胶原蛋白的总量多少克，这是一种误导，再大量的胶原蛋白，如果不能有效吸收也是没用的，所以低温萃取、被 蛋白酶 利用，成为被人体吸收的胶原蛋白肽产品，才是真正能给你带来肌肤改变的产品。当你选择口服胶原产品时，一定要记住这个衡量标准。每天的补充量在2.5-10克之间。搭配富含维C的植物提取物或维C，效果更好。
三大特点区别于同类产品：
1）1+5最优配方：胶原蛋白肽+5大植物抗氧化军团
1：每袋足足含有3克高浓度的全球精选的进口深海鱼皮胶原蛋白肽，来自具有26年研发生产经验的专业机构，拥有全球11大认证。
5：由5大植物精华组成的抗氧化军团：蔓越莓、接骨木莓、针叶樱桃、枸杞、绿茶。效果加成。
2） 临床认证 ：拥有临床试验和数据，最佳分子大小2000道尔顿，便于细胞识别，精准到达人体目标部位进行补充和积累，并形成长效和针对性的刺激作用，让我们自身胶原蛋白被大量生成。经人体肠胃、血管、皮肤直接吸收，吸收效果高达大分子量的600倍。
3） 方便 ：不用冲泡，随时随地，开袋即饮
无忧 ：无防腐剂和脂肪，低糖低钠
除了足量的进口胶原蛋白肽，还有五大植物抗氧化军团（联合抗衰抗氧化，阻止胶原蛋白流失， 不抗氧化补充胶原蛋白，很可能只是表面功夫 ）：
蔓越莓 ：来自北美，富含维生素C、花青素与生物类黄酮等，可以养颜美容，保护女性泌尿系统健康，帮助修复消化道粘膜组织，减缓心脑血管老化，帮助体内环保，酸酸甜甜的口感，适合长期食用。
接骨木莓 ：来自欧洲，富含多种生物活性物质，抵御肌肤衰老痕迹，促进皮肤健康。
针叶樱桃 ：来自巴西，富含维生素C，帮助净白肌肤，促进胶原蛋白合成。
枸杞 ：汉方传统植物成分，帮助肌肤抗氧化，维持良好的肌肤状态。
绿茶 ：富含绿茶多酚活性物质，抵抗氧化。
来看看两大临床试验：
一、这是8周后对皱纹的改善，皱纹明显减少32%，原胶原浓度明显增加65%，这种充盈和饱满就像很多弹力网把我们的皮肤重新撑开，这是来自于胶原蛋白进入体内以后努力的生长，所以在外在我们看到了明显的改变。
二、关于指甲，这也是我们在表面能看到的，食用6个月后，受试者明显感觉改善了指甲开裂、边缘不规则和粗糙的状态。75%的受试女性感觉到指甲变长，71%感觉指甲长的比原来快，而且能长更长。
外表看到的只是冰山一角，请相信身体里的更多改变。
所以，再次证明，优质的胶原蛋白肽产品，是可以让我们得到理想的变化，这就是为什么很多人那么多年一直孜孜不倦地寻找好的胶原蛋白产品。
这样喝，事半功倍！
早晨8：00：空腹一袋，补充一天所需
睡前22：00：美美来一袋，夜间修复
用量：每天1-2袋，视个人经济能力及对美和健康的投资意愿。
胶原蛋白的常见问题：
1、选择胶原蛋白的5个标准：
原料：深海鱼胶原提取最佳
含量：胶原蛋白肽2.5克以上
分子量：1000-3000道尔顿最佳（不是越小越好，得综合衡量）
配方：复方的植物提取精华，或维C
是否有权威第三方认证
2、氨基酸、肽与蛋白质的关系
答：2个以上氨基酸组成寡肽（低聚肽），10个以上氨基酸组成多肽，蛋白质通常由50个以上氨基酸组成。就好比单个珍珠、两个以上的珍珠和珍珠项链的关系。
由小到大的排列：氨基酸➡胶原蛋白肽➡胶原蛋白➡蛋白质
一定分子大小的胶原蛋白肽（1000-3000道尔顿），最容易被人体吸收合成胶原蛋白。胶原蛋白分子太大，直接补充，吸收率低。
3、胶原蛋白仅存在于动物中！
银耳、桃胶等植物不能补充胶原蛋白。
4、目前发现，以深海鱼皮为原料制成的胶原蛋白肽最好。
5、蛋白粉与维C能帮助身体合成胶原蛋白，属于间接补充； 胶原蛋白肽是直接补充，更高效。
两者对皮肤都好，对全身的骨骼、血管、结缔组织和跟腱组织都有保护和修复的作用。
6、胶原蛋白是安全的，属于食品原料，不存在激素问题。
7、不建议少年儿童补充胶原蛋白，不是不能，而是少年儿童正是胶原蛋白满满的时候，没有必要浪费。
8、胶原蛋白肽不仅仅是女士的专利，男士同样也有年轻冻龄和健康的需求。
⑶ 一只小鼠多少胰岛细胞
小鼠胰岛细胞分离自胰腺组织；胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂耐激肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成，胰岛主要由4种细胞组成：α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血睁帆糖素，升高血糖；β细胞分泌胰岛素，降低血糖；γ细胞分泌生长抑素，以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌；PP细胞分泌胰多肽，抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。
胰岛细胞作为糖尿病新药的细胞筛选模型需保持其结构完整、生理功能稳定和足够长的存活时间。胰岛占胰腺总质量的1%-2%，每个胰岛大概含有1000个细胞。胰岛移植可消除常规治疗产生的严重低血糖症状，具有创伤小及并发症少等优点，是最有前景的Ⅰ型糖尿病治疗方案。移植胰岛的获得需经过供体筛选、胰腺消化、胰岛分离纯化及结果鉴定等步骤，分离纯化效果取决于原料及操作方法的选择。
本公司生产的小鼠胰岛细胞采用胶原酶灌注消化法结合密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10^5cells/瓶；细胞经昌早袜DTZ染色鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
⑷ 【枫枫老师专栏】口服胶原蛋白对皮肤的作用综述——请认真阅
口服胶原蛋白或胶原蛋白水解产物是否有助于提升皮肤中胶原蛋白的含量、进而改善皮肤的水分、弹性等一直颇受争议。本文综述了近年来国内外关于胶原蛋白（尤其是口服胶原蛋白）对皮肤的效果研究，结果表明口服胶原蛋白及其水解产物，可以部分为肽的方式被快速吸收，靶向性被皮肤利用，显着提升皮肤中胶原蛋白的含量、抑制皮肤胶原蛋白降解、减少皮肤损伤，并改善皮肤的含水量等指标，是一种有效的皮肤改善营养品。
正文：
胶原蛋白广泛分布于人体骨骼、皮肤、血管、韧带、软骨等组织器官中，是结缔组织主要的结构蛋白，占动物总蛋白的25%~30%。迄今为止，共发现了20余种胶原蛋白，其中Ⅰ型胶原蛋白含量最高，约为90%。在皮肤中胶原蛋白分布于真皮层，含量约为70%，主要为I( 85% )、III和Ⅴ型[1]。
胶原蛋白被普遍认为真皮的支撑结构组成，其网状架构为皮肤提供了保护和弹性，在纤维之间则分布着大量的水分、细胞外基质和功能性细胞，是皮肤重要的生化反应场所，为表皮层提供水分和营养[2]。
真皮层胶原蛋白可被多种因素破坏：基质金属蛋白酶(MMP)可使其降解，自由基可使之变性，日光中的紫外线能够让胶原蛋白变性[3]，美拉德反应则可以让糖类和胶原蛋白反应形成糖基化产物[4]，发黄，并且失去弹性。在衰老皮肤中的胶原蛋白纤维明显比年轻的皮肤中纤维，而且纹路紊乱（降解后失去正常纹理）。真皮中胶原蛋白的含量随着年龄下降，在40岁以上和更年期妇女腹部皮肤中显着下降[5]。
真皮的胶原蛋白合成不足，或者被破坏过多，将会使皮肤弹性减弱，引发皱纹、缺水、光泽黯淡等多种衰老症状，因此保护和补充真皮中的胶原蛋白对于美容护肤有重要意义。补充维生素C等抗氧化剂、减少糖类食品的摄入、抑制MMP活性、避免紫外线，都有助于保护皮肤中的胶原蛋白免受损失，或者促进胶原蛋白的合成。
在中国传统上有食用驴皮（阿胶）、猪蹄、鸡爪美容抗皱的说法，这些食物的主要成分是胶原蛋白。同时市场上近年来流行服用胶原蛋白水解产物（CH）为主要功效成分制成的美容口服液或胶原蛋白粉。销售者相信其有提升皮肤胶原蛋白含量，并提升皮肤弹性、使皮肤变得更年轻、紧致的功效。但这一说法受到一些营养学家的驳斥，认为虽然胶原蛋白对皮肤有非常重要的意义，但这种传统上“吃什么补什么”的说法属于无稽之谈，没有可靠的研究证据证明口服胶原蛋白及其水解产物具有改善皮肤的功效，即使服用者认为有效，也多半是心理作用而已。反对的主要原因主要有：
口服的胶原蛋白并不一定能被人体吸收；
即使被消化，胶原蛋白也是被先分解成游离氨基酸再吸收，这与摄取其它食物中的氨基酸并无区别，并不能说明胶原蛋白比起其它蛋白质来源有什么优点；
即使胶原蛋白被消化后再吸收，也不能保证能够到达皮肤；
即使到达皮肤，也不能保证一定参与皮肤中胶原蛋白的合成。
本文综述了国内外近年来关于胶原蛋白的研究成果，就上述核心问题进行讨论。
1. 胶原蛋白的消化、吸收（吃了能被吸收吗？）
胶原蛋白是一种易于吸收的胶原蛋白，而且相当一部分是以多肽形式直接吸收入血的。冷向军等(2005）,Steffen Oesser(1999)等研究表明胶原蛋白吸收率超过95%，甚至可达100%，其中相当一部分蛋白质大分子可被肠直接吸收[6-8]，Mari Watanabe-Kamiyama, Muneshige Shimizu, Shin Kamiyama等(2010)通过14C标记，证明Winstar小鼠在摄入CH后3小时内，血浆中的胶原蛋白水解产物浓度就达到峰值[11]，这些都表明胶原蛋白水解产物可以被良好地消化和吸收。
Koji Iwai, TakanoriHasegaw(2005)等研究了来自猪皮、鸡爪和软骨的胶原蛋白多肽在人体的吸收。口服后1-2小时，就能够大量被吸收入血，而且证实其中有相当一部分（1/3或更多）是直接以肽的形式吸收的，而不是单纯的游离氨基酸（FAA）[9]。Hiroki Ohara, HitoshiMatsumoto（2007）用鱼鳞、鱼皮、猪皮胶原蛋白进行了吸收研究，证实了前面的成果，并发现进入血液中最多的肽是Pro-Hyp结构，Mari Watanabe-Kamiyama等(2010)也发现小鼠摄取CH之后，其血浆中显着出现了胶原蛋白特征性的Gly-Pro-Hyp三肽序列[11]。
基于前人的研究与自己的试验，Steffen Oesser(1999)认为：蛋白质分子必须先水解成游离氨基酸才能吸收入血（Boullin et al. 1973, Mathews andLaster 1965)的说法可能需要修正，其后有许多实验已经证实蛋白质大分子可以被肠直接吸收，甚至保持其原有功能[8]。
2. 胶原蛋白吸收后的分布（能否到达皮肤？）
试验证实：胶原蛋白及其水解产物被吸收后，可以到达皮肤并被皮肝利用。
Mari Watanabe-Kamiyama等利用放射性同位素14C示踪研究了来自鸡爪的I型胶原蛋白CH吸收后在小鼠身体的分布情况。口服后2~6小时，被标记的Gly-Pro-Hyp三肽分布至全身各主要器官。14天后，仅在皮肤中还保持着70%的放射水平。将小鼠皮肤进行水解并分析，证实其皮肤中的Gly-Pro-Hyp三肽就是来自鸡爪的三肽[11]。
Oesser等人报道的大分子的胶原蛋白可以被直接吸收并且富集在肾、软骨[8]，Mari Watanabe-Kamiyama等还发现，Gly-Pro-Hyp则特异性地沉淀在皮肤中。
上述试验表明I型胶原蛋白水解产物在被吸收后虽然初开始分布于全身，但可以靶向性地分布于富含胶原蛋白的组织中（包括皮肤）并且被特异性地利用34.讨论和展望. 口服胶原蛋白及CH对皮肤的作用
4.1 口服胶原蛋白及CH能够特异性使皮肤中胶原蛋白含量提升的机理
如前所述，现有试验证实口服胶原蛋白及CH/CP，有使皮肤中胶原蛋白含量提升，进而改善皮肤含水量、减少皮肤因UVB导致的损伤等多种好处。其机理可能是：为皮肤提供足够多的合成胶原蛋白所需的氨基酸作为原料，并且有相当一部分是以活性小肽的方式被直接、高效地吸收和利用，同时胶原蛋白肽能够抗氧化和抑制MMP2活性，从而保护皮肤中的胶原蛋白免于消耗、分解。
4.1.1 口服胶原蛋白及CH能够高效补充皮肤合成胶原蛋白所需要的氨基酸
胶原蛋白的氨基酸组成比例非常特殊，其中的甘氨酸、脯氨酸-羟脯氨酸含量达50%左右，一般的蛋白质食物中能够提供的这三种氨基酸数量远远不够。假设成人每天合成10g胶原蛋白，需要脯氨酸/羟脯氨酸约2.5g，假定食物的吸收率为100%，以鸡蛋提供的氨基酸为原料，则获得足够的脯氨酸/羟脯氨酸（脯氨酸在鸡蛋中的含量为3.07%[34]），共需要943g，大约19个鸡蛋。但若以胶原蛋白或CH供应这些氨基酸，只需10g就足够了。这说明口服胶原蛋白是高效的。
的确，甘氨酸、脯氨酸在传统上并不是人体必需氨基酸，可以通过其它氨基酸合成，但这引出两个问题：
1）酪氨酸、半胱氨酸、与谷氨酰胺、精氨酸，可有还有甘氨酸、脯氨酸一起被称为条件必需氨基酸，因为在特定的生理、病理条件下，它们的合成速度不能满足细胞需要[21]。在人体衰老时，由于自由基、内源性衰老因素、糖基化、光老化、MMP活跃等诸多因素，合成减慢而损失增多，合成胶原蛋白所需要的条件必需氨基酸很可能供应不足，因而需要特别补充。
2）即使必需氨酸摄入充分，可以转化成这些氨基酸，也必须获得其它氮源，这是一个耗能过程。试验证实，仅依靠必需氨基酸或高比例的必需氨基酸并不能使试验动物生长良好。1965年，FAO和WHO的专家组提出：“膳食中非必需氨基酸的比例，因而还有膳食中全部必需氨基酸与总氮的克数比，对必需氨基酸的需要有明显影响。”[21]
对机体来说，利用现有能够直接利用的氨基酸、多肽是耗能最低、速度最快的途径，这很可能是口服胶原蛋白对皮肤和其它富含胶原蛋白的结缔组织有高效作用的重要机制之一。
4.1.2 口服胶原蛋白及CH有高效的吸收途径与方式——多肽直接吸收
通常认为，蛋白质必须在小肠中被水解为游离氨基酸（FAA）才能够被吸收并被机体利用。这是有人认为口服摄入胶原蛋白与其它种类的蛋白质没有什么区别的根本原因。
然而事实并非如此。前述文献已经提到，来自于口服胶原蛋白和CH的肽结构在口服摄入2小时之后即在血浆中出现峰值，运输到达皮肤时仍然保持着原有的序列结构。
张伟、廖益平指出：因囿于Dogman的蛋白质必须被消化成FAA才能被吸收的观点，肽的研究一直处于停滞状态。Bachwell(1995)发现在肠刷状缘上有甘氨酰脯氨酸的寡肽转运系统。Grimble等(1986)研究表明，人体水解肽的能力很大，大量的小肽可穿过肠屏障，以小肽形式进入血液循环，对动物的研究得出，小肽被完整吸收后可以二肽、三肽的形式进入血液循环。肽的吸收不仅比游离FAA迅速，而且还有吸收率高的优势。In-fante(1992)和Boza(1995)证实，以寡肽形式为氮源时，整体蛋白质沉积高于相应AA日粮或完整蛋白质日粮。肽不仅是蛋白质代谢的底物，而且也是重要的生理活性调节物，它可以直接作为神经递质、间接刺激肠道受体激素或酶的分泌而发挥生理作用[22]。
在畜禽氨基酸需要量的研究工作中也发现，基础日粮选用的饲料来源不同，得到的氨基酸需要量结果有很大差异，原因是不同饲料中氨基酸利用率之间有差异(计成等，1984)。至于不同来源饲料的氨基酸利用率为什么存在差异，研究人员一直把它作为一个黑箱理论进行回避[23]。
研究已经证实，肽可以被直接吸收，有独立的转运机制，比FAA的吸收效率更高，应该能够解释这个黑箱理论，在口服胶原蛋白吸收上也是如此。
4.2.3 胶原蛋白肽可以被皮肤组织更高效地利用
传统上认为蛋白质的合成是从tRNA转运FAA至mRNA组装开始的。在mRNA上，FAA按照遗传密码依次排列组装形成肽链，之后再形成高级结构[36]。
Backwell(1994) 用同位素技术证实，组织本身有直接利用肽合成乳蛋白的能力。乐国伟等通过动物试验也发现，肽可以被组织直接利用，比起FAA，效率更高[22]。
已知在经典蛋白质合成过程中，每组装一个AA形成肽键，共需要消耗4个高能磷酸键[36]。但如果能够直接利用多肽，即是一个节能并且更快速的过程。不同的蛋白质来源可以水解出不同的肽[22]，可以猜测口服胶原蛋白和CH可以提供更适合机体高效、节能地合成自身胶原蛋白的肽，从而比其它蛋白质来源、或FAA更有优势（即：具有蛋白特异性[12]）。
4.4.4 CP提升皮肤胶原蛋白的其它作用机制（趋化性、信号传导、抗氧化，以及对MMP的抑制）
研究发现口服胶原蛋白和CH/CP后可特异性作用于胶原蛋白丰富的组织中，而且不同氨基酸序列的肽富集的部位不同：Gly-Pro-Hyp序列主要被皮肤利用[8，11]。这可能与成纤维细胞和胶原蛋白肽之间的趋化性有关。
体外细胞培养试验发现Pro-Hyp对成纤维细胞、外周血液嗜中性细胞、单核细胞具有趋化性[24,25]。Yasutaka Shigemura(2009)等的研究则重复证实了这一现象：Pro-Hyp可以显着加速成纤维细胞从皮肤中迁移至培养板，他们认为，Pro-Hyp可能是一个在正常和病理情况下都很重要的生理学角色。它可能在Pro-Hyp信号通路中担任信号肽角色，甚至被直接转运入成纤维细胞成为直接信号[15]。
口服胶原蛋白及CH对于皮肤组织中的胶原蛋白正面作用，还可能来自于其抗氧化作用、抑制MMPs的作用，使体内胶原蛋白避免被分解、破坏。
刘高梅（2012）的研究表明小分子胶原多肽具有显着的抗氧化作用[26]。
王洁昀(2009)发现高剂量骨胶原肽能显着提高模型小鼠血液及皮肤中总抗氧化能力及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化物酶活力（CAT）活力(P<0.05)，显着降低体内总自由基（ROS）水平及丙二醛（MDA）含量，效果略优于0.1%硫辛酸（LA）[27]。
MMPs活跃是导致胶原蛋白损失的主要原因之一。Vivian Zague的试验显示摄取CH显着降低了MMP2及其酶原的活性(P<0.05)，该MMP主要负责分解的I正是真皮的主要胶原蛋白——I型胶原蛋白。[18]。
4.2未来展望
口服胶原蛋白和CH有良好的效果和安全性。这是它作为皮肤保养品最重要的基础之一。
临床研究显示CH具有良好的耐受性[28-30]。在小鼠经口服或皮肤急性毒性试验中未观察到副作用或毒性反应[12,31]。研究其对不同菌株的沙门氏菌、埃希氏大肠杆菌（E. coli）、骨髓细胞的作用，未显示出任何突变增加或者致癌性[32]。所有现有数据清晰显示短期和长期口服CH都是安全的。
作为一种食品，FDA将CH列入GRAS（gernerally recognized as safe，普遍认为安全），属最高安全级别[33]。德国联邦药物和医学器械研究所、消费者事务部（Ministry for Consumer Affaires）、WHO也确认CH是安全的，大量或者食用一般数量均没有安全风险。
余宙, 范青生（2010）对口服鱼皮胶原蛋白对人体的一般安全性影响进行了观察，显示鱼胶原蛋白对人体健康无明显损害，心电图、腹部B超、胸检查等结果均在正常范围内[19]。
胶原蛋白及CH的作用机制还未完全明了，对人的临床研究还不普遍，在这方面显然还有大量的工作需要开展。但现有研究已经清晰指明了方向和趋势。
====2013年11月148日补充（以后会不定时根据最新研究进展补充证据，我不介意在有空时多贩点文献过来。我十分奇怪，研究不研究的，读不读文献的，都在那里发表意见，还一个比一个斩钉截铁，不知哪来的底气？难道就是高中教科书上那些过时了10年的知识么？）====
一项前瞻性、随机、对照研究结果认为口服补充胶原蛋白肽可改善皮肤水分和弹性。试验时间12周，24名女性和8名男性，年龄30~48岁，正常健康人群。用计算机随机分组，每组8人[ 引用文献 ：Choi S Y, Ko E J, Lee Y H, et al. Effects of collagen tripeptide supplement on skin properties: A prospective, randomized, controlled study[J]. Journal of Cosmetic and Laser Therapy, 2013 (0): 1-6.]。
3.1 口服胶原蛋白促进真皮胶原蛋白纤维合成、成纤维细胞（FB）增殖
Naoyamatsuda, Yoh-ichi Koyam等（2006）等研究了口服胶原蛋白对成纤维细胞和真皮细胞间质的作用。给猪喂食胶原蛋白多肽0.2g/kg共62天，试验表明口服胶原蛋白可以提升成纤维细胞密度，并以特异性蛋白方式促进真皮胶原蛋白纤维的形成[12]。
Naoya matsuda, Yoh-ichiKoyam等还曾报告了喂给胶原蛋白水解产物提升兔子跟腱中胶原蛋白纤维直径和密度的实验。实验均提示口服吸收的胶原蛋白可特异性地作用于胶原蛋白含量丰富的组织中的胶原蛋白纤维，例如跟腱、真皮[12]。
3.2 口服胶原蛋白对皮肤的作用
Sumida（2004）等通过试验评估了日常摄取CH(10g)对皮肤的影响。试验组为20位健康的日本女性，对照组为19人，服用安慰剂。在试验的60天中，发现试验组女性的皮肤吸水能力逐渐上升，不过相对于对照组，统计学差异不够显着。值得强调的是两组都有服用400mg维生素C，因此胶原蛋白的合成效果可以考虑是维生素C带来的[13]，但这是一个双因子试验，而且服用的Vc剂量很大，也并未否定胶原蛋白对皮肤的改善作用。
KoyamaYoichi等（2006）研究了日常摄食胶原蛋白多肽（CP）对人角质层含水能力的影响。试验组中健康的日本女性每人每天饮用含有10g CP的100ml饮料持续60天。试验组20位女性皮肤角质层吸水能力较对照组（服用安慰剂）高，未发现血检异常。提示口服CP可以提升角质层含水量而不会导致血液异常[14]。
Yasutaka Shigemura(2009)等研究了来自胶原蛋白的Pro-Hyp寡肽对小鼠皮肤中成纤维细胞迁移和生长的作用。试验结果提示Pro-Hyp可能刺激皮肤中成纤维细胞生长，并且增加从皮肤中迁移出的成纤维细胞数量[15]。
口服胶原蛋白可抑制UVB引起的皮肤损伤。Modori Tanaka等（2009）进行了为期6周的实验，试验组喂给小鼠喂食0.2g/kg/天的胶原蛋白多肽(CP)，发现：口服CP能显着提升角质层含水量，防止角质层因UVB照射而增厚，并增加小鼠真皮层中I型胶原蛋白含量(比对照组高出近2.5倍)。这可能是由于胶原蛋白多肽具有抗氧化作用，同时也可能是因为具有其它活性[16]。
Hiroki Ohara等人(2010)以培养的人皮肤成纤维细胞为材料，研究了多种CP对皮肤细胞外基质成分和细胞增殖的影响，发现浓度为200nmol/mL的Pro-Hyp提升了成纤维细胞增殖(1.5倍)及透明质酸的合成(3.8倍)，作者认为CP可以刺激细胞有丝分裂和透明质酸合成[17]。
VivianZague等（2011）研究了日常摄取的胶原蛋白水解物（CH）对于皮肤细胞外基质蛋白的影响。试验组小鼠皮肤中I型胶原蛋白增加了4倍(3.4±1.7)，投喂酪蛋白的对照组只有(0.8±0.5)。IV型胶原蛋白，试验组是(6.7±1.1) ，为对照组的3倍(2.3±1.2)。作者认为CH在营养学上并不被高看(氨基酸不完全)，但能显着促进I型胶原蛋白的合成。但对于人的皮肤作用，还需要临床研究[18]。
余宙, 范青生等（2010）观察了鱼皮中提取的胶原蛋白对人体皮肤水分和一般安全性的影响，试验认为口服鱼胶原蛋白有显着提升皮肤水分的作用[19]。
周双琳，王海燕等（2011）观察了小分子鱼胶原蛋白粉对改善女性面部肤质的有效性和安全性。用问卷调查、Visia、皮肤水份测试仪等分析皮肤。问卷调查结果显示：口服小分子鱼胶原蛋白粉有改善睡眠及增强体力的作用，受试组健康评分较口服前有明显改善（P＜0.05）。仪器测试显示：受试组面部皮肤的细纹、毛孔、纹理 、紫质、水份、油脂改善明显（P＜0.05）(试服者的自我感受与仪器测试结果趋势一致)。受试前后志愿者无明显不良反应。结论认为口服小分子鱼胶原蛋白粉可一定程度地改善女性面部肤质，且无明显不良反应，具有较好的安全性和有效性[20]。
⑸ 小鼠肝脏组织单细胞解离
肝脏，是脊椎动物身体内以代谢功能为主的一个器官，并在身体里面充分扮演着去氧化，储存肝糖，分泌性蛋白质的合成等。肝脏是由肝细胞组成，肝细胞极小，肉眼看不到，必须通过显微镜才能看到。人肝约有25亿个肝细胞，5000个肝细胞组成一个肝小叶，因此人肝的肝小叶总数约有50万个。肝细胞为多角形，有6-8个面，不同的生理条件下大小有差异，如饥饿时肝细胞体积变大。每个肝睁卜细胞表面可分为窦状隙面、肝细胞面和胆小管面三种。
肝脏的主要连接成分主要是结缔组织，因此我们选择使用胰蛋白酶对肝脏进行第一轮解离，枯草芽孢杆菌蛋白酶可水解天然和变性蛋白，并且在碱性条件下具有活性。我们使用其对肝脏组织进行进一步解离。
为了保存小鼠肝脏完整的基因表达谱，联川生物将成年小鼠肝脏置于冰上进行解离。小鼠肝脏第一层由0.25%胰蛋白酶在4℃下离解离10min，第二层解离由添加地衣芽孢杆菌酶，胶原酶及DNase I 组成的混合酶。解离产率为5000cells/mg，存活率大于等于93%（以AO/PI计数为标准）。
1.在预冷的组织保存液中保存及运输组织，配制酶解离液，置于冰上待用，离心机调整至 4℃ 预冷；
2.将放有你1/2 体积 DPBS 的培养皿置于冰上，使用无菌的剪刀及镊子剪切组织直至糊状；
3.使用 DPBS 对剪切的组织进行过筛清洗；
4.离心管中每30 mg肝组织中加入1 mL 胰酶 ，通过摇晃离心管重新悬浮组织颗粒，在室温下静置10 min。
5.在离心管中加入5mL预冷的DPBS，稀释胰蛋白酶混合液，终止消化。
6.在离心机中使用250g 4℃ 离心5min后，除去上清液；
7.在离心机中加入4mL预冷的DPBS重悬细胞核组织，在冰上沉淀40s 大组织块沉降（此时释放的细胞留在上清液中）。
8.将悉悔穗收集的上清液（含细胞）通过40µM细胞筛过滤，去除结团细胞及组织块；
9.过滤后的细胞悬液通过4℃ 300g离心 5min 收集；后再使用0.5 mL的PBS （含1% BSA）重悬细胞，置于冰上保存。
10.将步骤 7 中剩余的组织块加入组织解离酶（5mg/mL，胶原酶 IV 0.8mg/ml，DNase I 0.5mg/ml），置于37℃ 的摇床上 80rpm/min进行解离；
11.消化 8-12min之后，加入两倍体积前腔的 DPBS稀释终止消化，取出离心管，涡旋仪上，轻微涡旋2-3次（2S/次）。
12.将终止消化后的酶及细胞混合物分别通过 70μm和40μm的细胞筛，下清液离心收集细胞。
13.在4°C下旋转300 g 离心5 min，除去上清液，使用DPBS（含1% BSA）重悬细胞，置于冰上备用。
14.将步骤9 ，步骤12中的细胞4°C下旋转300 g 离心5 min离心收集，弃上清；加入1-4mL红细胞裂液，置于冰上3-5min裂红。
15.裂红结束后加入等体积的DPBS, 在4°C下, 300 g 离心5 min 收集细胞，弃除裂红液；
16.使用0.5% BSA的DPBS重悬细胞，离心收集，弃上清，而后用含有0.5% BSA的DPBS重悬细胞，用AO/PI染料染色计数。
注意：肝脏组织中杂质及碎片较多，且肝细胞容易破裂；所以解离过程中要注意根据实际情况适当下调。富集细胞时的离心力，为达到彻底清洗碎片和杂质的目的，在解离过程中使用的解离酶浓度和强度不宜过高，获取的单细胞悬液如果用于单细胞测序，则需要在获取细胞悬液之后尽快进入下游建库，避免因细胞破裂引入RNA 污染问题，从而影响测序数据质量。
以上内容来自生信技能树和联川生物，有小伙伴如果照着这个步骤做了方便的话留言反馈效果如何哈~（带图的最好）