胶原酶激活用多少浓度的氯化钙

① 酶的激活剂的分类及其作用和作用机理

激活剂的影响 凡是能提高酶活性的物质都称为激活剂。大部分激活剂是离子或简单有机化合物。按照分子大小，可分为三类：

1.无机离子 可分为金属离子、氢离子和阴离子三种。起激活剂作用的金属离子有钾、钠、钙、镁、锌、铁等，原子序数在11－55之间，其中镁是多种激酶及合成酶的激活剂。阴离子的激活作用一般不明显，较突出的是动物唾液中的α淀粉酶受氯离子激活，溴的激活作用稍弱。
激活剂的作用有选择性，对另一种酶可能起抑制作用。有些离子还有拮抗作用，如钠抑制钾的激活作用，钙抑制镁。有些金属离子可互相替代，如激酶的镁离子可用锰取代。激活剂的浓度也有影响，浓度过高可能起抑制作用。如对于NADP+合成酶，镁离子浓度在5－10×10-3M时起激活作用，在30×10-3M时酶活下降。
2.中等大小有机分子 某些还原剂如半胱氨酸、还原型谷胱甘肽、氰化物等，能激活某些酶，打开分子中的二硫键，提高酶活，如木瓜蛋白酶、D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶等。另一种是EDTA，可螯合金属，解除重金属对酶的抑制作用。
3.蛋白质类 指可对某些无活性的酶原起作用的酶。

② sigma的胶原酶可以用PBS配制吗

sigma的胶原酶不可以用PBS配制
需要用HBSS缓冲液（即hanks液）配制，没有的话用DMEM也行
上述两种都含有钙离子，而胶原酶的活性是有赖于钙离子的
所以sigma的胶原酶不可以用PBS配制

③ 从组织细胞中获得酶的粗提取样品常有哪些方法

从动物胰脏中提取胰蛋白酶,一般是用稀酸将胰腺细胞中含有的胰蛋白酶原提取出来,然后根据等电点沉淀的原理将提取液的pH值调至酸性（pH3.0左右）,使大量的酸性蛋白沉淀出来.经硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原沉淀.沉淀物经水溶解并调至pH8.0,用极少量的胰蛋白酶将胰蛋白酶原激活,同时溶液中的胰凝乳蛋白酶原和弹性蛋白酶原也被激活,三种酶原相互作用过程如下：
也可采用从胰脏中提取出胰蛋白酶原,利用合适的提取溶液的pH值促使胰蛋白酶原部分自溶,并通过溶液中Ca2+的环境,使胰蛋白酶原被开始自溶的少量具有活性的胰蛋白酶所激活,转变为具有活性的胰蛋白酶（胰凝乳蛋白酶原及弹性蛋白酶原亦同时被胰蛋白酶激活成有活性的酶）.
激活后的酶溶液再进一步分离纯化.
〔试剂和器材〕
1、试剂
（1）pH2.3.0乙酸化的水溶液
（2）10%（体积分数）乙酸
（3）2mol/L硫酸
（4）固体硫酸铵
（5）无水CaCl2
（6）结晶胰蛋白酶
（7）25%乙醇溶液(含0.015mol/LHCl 、0.05mol/LCaCl2)
（8）95%（体积分数）乙醇
（9）5mol/L NaOH
（10）丙酮
2、器材
（1）胰脏
（2）组织捣碎机
（3）离心机
（4）磁力搅拌器
（5）透析袋、20目筛网、纱布、水浴锅
（6）烧杯、量筒、刻度吸管、试管、玻璃漏斗
（7）布氏漏斗、抽滤瓶、温度计、滴管、玻璃搅棒、纱布、pH试纸等
〔方法和步骤〕
方法一
1、 胰蛋白酶原的提取
取新鲜胰脏约150g,剥去结缔组织和脂肪,取净重100g,切成碎块,在组织捣碎机中捣碎,并加入2倍体积预冷的pH2.3.0乙酸化水溶液,制成匀浆.浆液倒入500mL烧杯中,用10%（体积分数）乙酸调节pH在2.3.0之间,在5～10℃下提取6h以上,并间隙轻轻搅拌.用4层纱布过滤,尽量挤出滤液.组织残渣中再加入0.5倍体积（约50mL左右）预冷的pH2.3.0乙酸化水溶液再提取一次（放置1～2h）,再用4层纱布过滤.合并两次滤液,用2.5mol/L硫酸调节滤液pH在2.3.0之间,4℃放置4h（pH始终保持在2.3.0）,使提取液中酸性蛋白沉淀析出.提取液用折叠滤纸于玻璃漏斗中自然过滤,收集滤液,量取体积（约200mL左右）.
滤液中加入粉末状固体硫酸铵,使溶液达0.75饱和度（每升滤液加492g,5℃）.放置过夜,使胰蛋白酶原完全析出.次日抽滤,弃滤液,压紧并收集滤饼,即胰蛋白酶原粗品.
2、 胰蛋白酶原的激活
将胰蛋白酶原粗品称重（湿重）,分次加入10倍体积预冷的蒸馏水（按滤饼重量计算）,使滤饼完全溶解（一般情况滤饼中硫酸铵含量约占饼重1/4）.用5mol/L NaOH将溶液调至pH8.0,慢慢地搅拌下加入固体无水CaCl2使溶液的Ca2+终浓度达到0.1mol/L（要减去一部分氯化钙与硫酸铵结合生成硫酸钙的钙离子）.取出2mL溶液用于测定激活前的蛋白含量及酶活性.原溶液中加入5mg结晶胰蛋白酶,轻轻搅拌均匀,25℃放置2～4h,或4℃放置12～16h,使胰蛋白酶原活化.每隔1h取样测定胰蛋白酶活性增长情况,直至酶激活速度变慢或停止增长.一般比活可达到3 500～4 000 BAEE单位/mg.留取2mL溶液用于测定激活后的蛋白质含量和酶活性.激活酶溶液用2mol/L硫酸调pH至2.3.0,滤纸过滤,滤去硫酸钙沉淀,收集滤液,4℃保存备用.
方法二
称取冷冻猪胰脏100g,在2～5℃下解冻,切成小块,用组织捣碎机中绞碎成胰浆,在5～10℃存放24h以上,使胰酶自身活化.胰浆中加入25%（质量分数）乙醇溶液250mL（25%乙醇溶液中加0.015mol/L HCl 、0.05mol/L CaCl2）,捣碎机中捣碎1min.胰浆倒入500mL烧杯中,间隙搅拌,温度20℃左右,活化5～6h.每隔1.5h,吸取2mL活化液用于测定激活后的蛋白质含量和酶活性.
活化反应结束后,胰浆3 500 r/min离心20min,将离心后上清液用二层纱布过滤.滤液置250mL烧杯中,以过滤清液的体积为准,加入粉末状硫酸铵,搅拌溶解,使溶液硫酸铵饱和度为20%.放置 6h后,3 500 r/min离心20min,保存上清液待用,取沉淀.沉淀分别用适量95%乙醇洗涤过滤,再用丙酮洗涤,过滤.最后将沉淀置于表面皿上自然干燥,即得胰蛋白酶粗品Ⅰ.
在上述离心上清液中,加入粉末状硫酸铵,搅拌溶解,使上清液溶液达到55%硫酸铵饱和度,放置 6h后,3 500 r/min离心30min,取离心沉淀,分别用适量95%乙醇、丙酮洗涤,过滤后将沉淀置于表面皿上自然干燥,即得胰蛋白酶粗品Ⅱ.

④ 氯化钙常用的含量有多少的

常用氯化钙有二水氯化钙和无水氯化钙之分，还有液体氯化钙，国标二水氯化钙含量74以上，无水含量94以上。液体氯化钙就根据自己的要求配兑，一般含量在20-40浓度不等。

⑤ 30吨盐水配多少氯化钙

一般配置氯化钙浓度在30%左右。所以说氯化钙用量在10吨。其余是自来水。
但是氯化钙溶液具有很高的腐蚀性，设备使用1年后，就可能出现管道腐蚀漏孔。
上海趋寒流体，专业提供低温载冷剂，冷冻盐水，以及防腐蚀解决方案。

⑥ 胶原酶的配置

胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。
注意：
因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。
钙、镁离子和血清成分不会影响胶原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培养液配制。

⑦ 氯化钙在微生物培养基中的作用

氯化钙就是为了提供钙离子，是某些酶的激活剂，其次是凝固琼脂的作用。
另外需注意，这个要分开灭菌，因为其中的钙离子容易与磷酸盐产生沉淀，当然这主要是一般氯化钙的量较大。
氯化钙可以用碳酸钙代替，如果你想兼顾调节ph的话。

希望能帮助您。^__^

⑧ 氯化钙在微生物培养基中的作用

氯化钙就是为了提供钙离子，是某些酶的激活剂，其次是凝固琼脂的作用。
另外需注意，这个要分开灭菌，因为其中的钙离子容易与磷酸盐产生沉淀，当然这主要是一般氯化钙的量较大。
氯化钙可以用碳酸钙代替，如果你想兼顾调节ph的话。
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⑨ 植物激素和钙离子生理作用探究氯化钙溶液浓度多少合适

植物激素和钙离子生理作用探究氯化钙溶液浓度0.9摩尔合适。

氯化钙物质的量为100克111克每摩=0.9摩。氯化钙溶液摩尔浓度为0.9摩.1升=9摩每升（按溶解不增体积算，否则就除以溶液体积），密度是质量除以体积，溶质也会增加溶液的体积（虽然不多） 应该是100除以溶液总体积。

基本分类

浓度指某物质在总量中所占的分量。

常用的浓度表示法有：

质量百分浓度（质量分数，m/m）：最常用。指每100克的溶液中，溶质的质量（以克计）。

质量百分浓度=(溶质质量(g))/溶液质量(g))×100%=溶质质量(g))/(溶质质量(g)+溶剂质量(g))×100%。

体积百分浓度（体积分数，V/V）：常用于酒类。指每100毫升的溶液中，溶质的体积（以毫升计）。

以上内容参考：网络-浓度

⑩ 胶原酶和胰酶在细胞原代培养中的区别

胶原酶在上皮类细胞原代培养时经常使用，作用对象是胶原组织，因此不容易对细胞产生损伤。消化原代培养的上皮类细胞用此酶效果更好。

胰蛋白酶（简称胰酶）是广泛应用的消化剂.胰蛋白酶是一种胰脏制品,对蛋白质有水介作用,主要作用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键,使细胞间质中的蛋白质水介而使细胞分散开,在常用的蛋白酶中由于产品的活力和纯度不同,对细胞的消化能力也不同,胰蛋白酶对细胞的作用,取决于细胞类型、酶的活力、配制的浓度、消化的温度、无机盐离子、pH以及消化时间的长短等.

胶原酶是一种从细菌中提取出来的酶,对胶原有很强的消化作用.适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织,它对细胞间质有较好的消化作用,对细胞本身影响不大,可使细胞与胶原成分脱离而不受伤害.该酶分离效果好,即使有钙、镁离子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培养液配制,即操作简便又可提高细胞成活率,最终浓度200u/mL或0.0.3mg/mL.此酶消化作用缓和,无需机械振荡,但胶原酶价格较高,大量使用将增加实验成本.