‘壹’ transwell 用多少浓度bsa悬浮细胞
染色
粗面朝置于结晶紫染液30min铺膜（粗面朝）
4再甲醇粗面朝固定5min彻底晾干新滤纸粗面朝放置彻底晾干拿室甩掉边培养基擦尽室边细胞（能碰外边）细胞迁移实验步骤（Neuroprobe使用）
1．膜预处理
48.5ml H2O +1移空24孔板即显微镜观察.5ml 醋酸+150μL 鼠尾胶原置于50ml离管装塑料垫. 固定
膜取细胞消化室放入装600ml结晶紫24孔板染色1调浓度拿24孔板加600ml含刺激培养基
3加细胞放入24孔板放入细胞培养箱培养4-6室膜粗糙面用铅笔做标记放入述溶液4度夜
实验前膜取放入装PBS培养皿漂洗遍再用饥饿培养基洗遍吸培养基加入新饥饿培养基放入37度培养箱
2. 处理细胞
细胞消化调浓度1×105/ml与boyden chemper类似
Transwell步骤：
先室擦干净超净工作台照紫外夜新室省略步步室倒扣并室底部外侧滴加0.1%（1%记清）明胶室温放置20-30钟细胞迁移装置层加入166μl含刺激饥饿培养基粗面朝放载玻片数细胞
比transwell便取膜用双蒸水漂洗遍固定层装置层加入100μl细胞悬液迁移4-6h室未干明胶甩掉用PBS弄湿滤纸挂掉光滑面细胞
‘贰’ transwell共培养的小室膜上要铺胶不呢我用0.4um的孔径，铺什么胶呢 我用的是密理博的悬挂式
细胞迁移实验步骤（Neuroprobe的使用方法）
1．膜预处理
将48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾胶原置于50ml的离心管。在膜的粗糙面用铅笔做标记，放入上述溶液中4度过夜。
实验前将膜取出，放入装有PBS的培养皿中漂洗一遍，再用饥饿培养基洗一遍，吸去培养基后加入新的饥饿培养基，放入37度培养箱中。
2. 处理细胞
将细胞消化，调浓度1×105个/ml，细胞迁移装置下层加入166μl含有刺激因子的饥饿培养基。小心铺好膜（粗面朝下），装好塑料垫，固定上层装置。上层加入100μl细胞悬液，迁移4-6h。
3. 固定
小心将膜取下来，在用PBS弄湿的滤纸上挂掉光滑面的细胞，在新的滤纸上粗面朝上放置，彻底晾干。然后再甲醇里粗面朝上固定5min，彻底晾干。
4. 染色
粗面朝下置于结晶紫染液中30min，取出膜用双蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在载玻片上，数细胞。
这个方法比transwell方便。与boyden chemper法类似。
Transwell法的步骤：
先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜。如新的小室省略此步。下一步将小室倒扣并小室的底部外侧滴加0.1%（还是1%记不清了）的明胶室温放置20-30分钟。这是将细胞消化下来，调浓度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培养基。小室上还未干的明胶甩掉，加细胞放入24孔板里。放入细胞培养箱培养4-6小室。拿出小室甩掉里边的培养基。小心擦尽小室里边的细胞（不能碰外边）。将小室放入装有600ml结晶紫的24孔板染色1小时。移到空的24孔板后即可在显微镜下观察了。
‘叁’ transwell多少24小时
细胞迁移实验步骤（Neuroprobe的使用方法）1．膜预处理将48.5mlH2O+1.5ml醋酸+150μL鼠尾胶原置于50ml的离心管。在膜的粗糙面用铅笔做标记，放入上述溶液中4度过夜。实验前将膜取出，放入装有PBS的培养皿中漂洗一遍，再用饥饿培养基洗一遍，吸去培养基后加入新的饥饿培养基，放入37度培养箱中。2.处理细胞将细胞消化，调浓度1×105个/ml，细胞迁移装置下层加入166μl含有刺激因子的饥饿培养基。小心铺好膜（粗面朝下），装好塑料垫，固定上层装置。上层加入100μl细胞悬液，迁移4-6h。3.固定小心将膜取下来，在用PBS弄湿的滤纸上挂掉光滑面的细胞，在新的滤纸上粗面朝上放置，彻底晾干。然后再甲醇里粗面朝上固定5min，彻底晾干。4.染色粗面朝下置于结晶紫染液中30min，取出膜用双蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在载玻片上，数细胞。这个方法比transwell方便。与boydenchemper法类似。Transwell法的步骤：先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜。如新的小室省略此步。下一步将小室倒扣并小室的底部外侧滴加0.1%（还是1%记不清了）的明胶室温放置20-30分钟。这是将细胞消化下来，调浓度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培养基。小室上还未干的明胶甩掉，加细胞放入24孔板里。放入细胞培养箱培养4-6小室。拿出小室甩掉里边的培养基。小心擦尽小室里边的细胞（不能碰外边）。将小室放入装有600ml结晶紫的24孔板染色1小时。移到空的24孔板后即可在显微镜下观察了。
‘肆’ 鼠尾胶原蛋白I型，用那一种胶原酶可以溶解
醋酸就可以.
1．将胶原加入到0.1M 的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。
2．建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。
3．稀释一定数量的胶原溶液。
4．按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。
5．从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的，这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。 在接种细胞前用无菌的水漂洗。
‘伍’ 细胞粘在鼠尾胶原上，消化了4分钟细胞也下不来怎么办
不鸟可以吃一点药啊，可以去医院买一点
‘陆’ 求细胞迁移实验步骤（Transwell或细胞划痕法都可以）
细胞迁移实验步骤（Neuroprobe的使用方法）
1．膜预处理
将48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾胶原置于50ml的离心管。在膜的粗糙面用铅笔做标记，放入上述溶液中4度过夜。
实验前将膜取出，放入装有PBS的培养皿中漂洗一遍，再用饥饿培养基洗一遍，吸去培养基后加入新的饥饿培养基，放入37度培养箱中。
2. 处理细胞
将细胞消化，调浓度1×105个/ml，细胞迁移装置下层加入166μl含有刺激因子的饥饿培养基。小心铺好膜（粗面朝下），装好塑料垫，固定上层装置。上层加入100μl细胞悬液，迁移4-6h。
3. 固定
小心将膜取下来，在用PBS弄湿的滤纸上挂掉光滑面的细胞，在新的滤纸上粗面朝上放置，彻底晾干。然后再甲醇里粗面朝上固定5min，彻底晾干。
4. 染色
粗面朝下置于结晶紫染液中30min，取出膜用双蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在载玻片上，数细胞。
这个方法比transwell方便。与boyden chemper法类似。
Transwell法的步骤：
先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜。如新的小室省略此步。下一步将小室倒扣并小室的底部外侧滴加0.1%（还是1%记不清了）的明胶室温放置20-30分钟。这是将细胞消化下来，调浓度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培养基。小室上还未干的明胶甩掉，加细胞放入24孔板里。放入细胞培养箱培养4-6小室。拿出小室甩掉里边的培养基。小心擦尽小室里边的细胞（不能碰外边）。将小室放入装有600ml结晶紫的24孔板染色1小时。移到空的24孔板后即可在显微镜下观察了。