鼠尾膠原每次可以提多少

Ⅰ 膠原鋪板方式

1、配製0.2％醋酸溶液，經高壓蒸汽滅菌後備用。

2、將鼠尾膠原蛋白加入配好的醋酸溶液，過濾除菌，放入-20度冰箱儲存。

3、按每平方厘米取2.5微克鼠尾膠原母液加入到6孔板中，使平皿含有5微克平方厘米的膠原，用無菌桿推桿將鼠尾膠原平鋪在皿底，打開強風吹60分鍾，待乾燥，然後開紫外照射過夜（也可不照紫外，乾燥後立刻使用，）第二天使用。

膠原是哺乳動物體內含量最多的一類蛋白質，占蛋白質總量的25%~30%，廣泛存在於從低等脊椎動物的體表面到哺乳動物機體的一切組織中。

Ⅱ 鋪上鼠尾膠原可以照紫外光嗎

鋪上鼠尾膠原可以照紫兆哪渣外光。紫外光具有消毒殺菌的作用，而鼠尾膠具有大量細菌，使用之前需要消毒殺菌。所以緩游鋪上鼠族悄尾膠原可以照紫外光。

Ⅲ 膠原蛋白線面部提升可以維持多少時間

膠原蛋白線面部提升確切效果可維持2-3年，保養得好體內營養充足甚至5－10年以上。
膠原蛋白線面部提升是通過在皮膚下埋線的方式，將長度在10-35mm的膠原蛋白線埋入皮膚，對面部進行「提升」和「除皺」兩大功效。
1、不用擔心術後的一系列限制 膠原蛋白線區別於一般的鋸齒線提升、金線提升，擁有不可比擬的可吸收性。要知道金線提升後，因為面部埋有金線，是不能進行如熱瑪吉這樣的激光治療的，而膠原蛋白線在填補皮膚膠原蛋白後會直接被吸收，絲毫不用擔心術後的限制。
2、術後不會有異物感 皮膚內埋入膠原蛋白線後，不會有任何異物感，術後一段時間就會自行溶解，對於敏感性皮膚的人群非常合適。
3、擁有改善面部氣血的效果 使用膠原蛋白線提升後，能夠改善皮膚的血液循環，術後7日左右面色會慢慢變的紅潤，對於臉色蒼白的人群有不錯的治療效果。

Ⅳ 有哪位高手能詳細指導一下用transwell板做細胞趨化實驗的具體方法和步驟嗎

1
材料與方法
1.
1
Matrigel：Becton
Dickinson
Compary,
-
20
℃保存；
Tanswell
plate：Costar
,USA
,
#
3422
,聚碳酯膜微孔直徑為8μm；
蘇木素染液，梯度乙醇，二甲苯溶液。
1.
2
趨化因子的制備
取傳代第二天長勢良好的NIH3T3細胞,無血清培養基輕柔漂洗兩次;
加入無血清培養基,37℃,5
%CO2
培養24
h～48h，收集細胞培養上清；4
℃,12
000rpm
離心,10
min
,取上清；0.22
μm
濾膜過濾除菌；分裝,在-
20
℃保存。
1.
3
transwell
培養板准備
所有操作均需無菌操作。-20℃保存的Matrigel
在冰上保2℃～8℃過夜融化。在冰上用預冷的槍頭吸取100μl
Matrigel
加入冰預冷的300μl
無血清培養基中,充分混均。取上述稀釋的Matrigel
25
μl
加入transwell
板上室,覆蓋整個聚碳酯膜,37
℃,30
min
,使Matrigel
聚合成膠。已鋪好Matrigel的transwell
培養板置於37℃可保存2
周。
1.
4
Matrigel
侵襲實驗(Matrigel
Invasion
Assay)刺激後的各組細胞用PBS
漂洗3
次。以常規方法用無血清培養基制備單細胞懸液,5
×105個細胞/
ml
,每組細胞各分為兩部分。胎盤蘭拒染實驗,細胞活力需大於95
%。Transwell
培養板上室加入100μl
細胞懸液(
5
×104
個)
並加入無血清培養基200
ul
。Transwell
培養板下室加入500μl
趨化因子,37℃,5
%CO2
培養24
h。用濕棉簽輕輕擦去Matrigel
凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞。小心取出上室,用線拴住,並做好標記,用冰預冷的甲醇固定30
min。蘇木素染色1
min。梯度乙醇脫水(80
%
,95
%
,100
%)
,二甲苯透明。小心將聚碳酯膜自上室基底切取下來,置載玻片上中性樹脂封片。附著於聚碳酯膜下表面的細胞在高倍鏡下(
×400)
隨機取6
個視野[1
]
計數,取平均數。重復實驗兩次。
注意
2.
1
NIH3T3
細胞制備的趨化因子與胎牛血清
趨化因子是能使細胞產生趨化運動的一類細胞因子[2
]
。目前利用NIH3T3
細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗的實驗室比較多,時間較長且實驗步驟繁瑣。眾所周知,胎牛血清中有趨化因子,我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810
膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗中發現用胎牛血清和用NIH3T3
細胞制備的趨化因子做細胞體外侵襲實驗效果是一樣的,兩組遷移的細胞數很接近。在實驗時間上，用NIH3
T3細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為1
周,而用胎牛血清作趨化因子做細胞體外侵襲實驗周期為2
d
,實驗時間節省了很多。因此認為可以用胎牛血清來代替NIH3T3
細胞制備的趨化因子。
2.
2
細胞的准備
所需細胞應處在對數生長期,細胞活力需大於95
%。如果細胞活力小,就會造成細胞穿透能力下降,影響實驗結果。
2.
3
擦去Matrigel
凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞
先用干棉簽將上室內液體吸去,再用蒸餾水浸濕的棉簽輕輕擦去Mat
rigel
凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞,如果沒有擦凈聚碳酯膜上表面的細胞,在細胞計數時就會將沒擦掉的細胞也計進來。尤其是細胞為圓形的時候,就會分辨不出是穿過去的細胞還是沒穿過去的細胞,對於長梭形細胞來說,穿過去的細胞為長梭形,沒穿過去的細胞多為圓形。
2.
4
蘇木素染色
上室浸泡在新蘇木素中的時間為1
min
,用過多次的蘇木素為2
min。在研究粉防己鹼對HUVEC
人類臍靜脈內皮細胞遷移能力的抑製作用沒有將多餘蘇木素洗去,直接脫水、透明,造成細胞圖片背景模糊,細胞不清楚(見圖1)
。在作不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810
膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗時我們將其置於盛有自來水的燒杯中,反復漂洗幾次,將多餘蘇木素洗去再行脫水、透明;這樣做出的細胞圖片背景干凈,細胞清楚(見圖2)
。

Ⅳ 膠原酶和胰酶在細胞原代培養中的區別

膠原酶在上皮類細胞原代培養時經常使用，作用對象是膠原組織，因此不容易對細胞產生損傷。消化原代培養的上皮類細胞用此酶效果更好。

胰蛋白酶（簡稱胰酶）是廣泛應用的消化劑.胰蛋白酶是一種胰臟製品,對蛋白質有水介作用,主要作用於賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵,使細胞間質中的蛋白質水介而使細胞分散開,在常用的蛋白酶中由於產品的活力和純度不同,對細胞的消化能力也不同,胰蛋白酶對細胞的作用,取決於細胞類型、酶的活力、配製的濃度、消化的溫度、無機鹽離子、pH以及消化時間的長短等.

膠原酶是一種從細菌中提取出來的酶,對膠原有很強的消化作用.適於消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對細胞間質有較好的消化作用,對細胞本身影響不大,可使細胞與膠原成分脫離而不受傷害.該酶分離效果好,即使有鈣、鎂離子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培養液配製,即操作簡便又可提高細胞成活率,最終濃度200u/mL或0.0.3mg/mL.此酶消化作用緩和,無需機械振盪,但膠原酶價格較高,大量使用將增加實驗成本.

Ⅵ 鼠尾膠原蛋白為什麼不凝固

缺少蛋白酶。鼠尾膠原蛋白然培養基和一種天然的黏附劑，其中不凝固的原因是缺少蛋白酶，膠原蛋白是生物高跡老唯含槐分子姿培，動物結締組織中的主要成分，也是哺乳動物體內含量最多、分布最廣的功能性蛋白。

Ⅶ 膠原蛋白粉的每次使用量是多少

蛋白粉成人用量為0.8g/KG

折算下來，一個50KG的年人，每天可以食用40g的蛋白質

如果是膠原蛋白的話，那麼你需要先清楚，你吃的是不是膠原蛋白（看氨基酸成分），我每天只使用了3克，48天皺紋就緩解了。

抬頭紋明顯緩解咯。

提示：膠原蛋白，有沒有效果，看氨基酸組成。

Ⅷ 鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解

醋酸就可以.

1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。

2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，並小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。

3．稀釋一定數量的膠原溶液。

4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。

5．從包被表面除去多餘的液體。過夜乾燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。