提軟骨二型膠原酶用什麼配

㈠ 膠原酶的配置

膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配製、消毒滅菌和儲藏。
注意：
因為Ⅰ型膠原酶分子顆粒比胰酶大，不容易過濾，因此可以用蔡式濾器過濾除菌。
鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培養液配製。

㈡ 膠原蛋白用什麼原料做出來的，有什麼作用

畜禽源動物組織是人們獲取天然膠原蛋白及其膠原肽的主要途徑。

但由於相關畜類疾病和某些宗教信仰限制了人們對陸生哺乳動物膠原蛋白及其製品的使用，現今正在逐步轉向海洋生物中開發。

膠原蛋白是生物高分子，動物結締組織中的主要成分，也是哺乳動物體內含量最多、分布最廣的功能性蛋白，占蛋白質總量的25%～30%，某些生物體甚至高達80%以上。

膠原蛋白的應用：

1、生物醫學材料

膠原蛋白是肌體自然蛋白，對皮膚表面的蛋白質分子具有較大的親和力、較弱的抗原性、良好的生物相容性和生物降解安全性，可降解吸收，粘著力好。

由膠原製成的手術縫合線既有與天然絲一樣的高強度，又有可吸收性，在使用時既有優良的血小板凝聚性能，止血效果好，又有較好的平滑性和彈性，縫合結頭不易鬆散，操作過程中不易損傷機體組織，對創面有很好的黏附性，一般情況下只需較短時間的壓迫就可達到滿意的止血效果。

所以膠原蛋白可以製成粉狀、扁狀及海綿狀的止血劑。同時用合成材料或膠原蛋白在血漿代用品、人造皮膚、人工血管、骨的修復和人工骨和固定化酶的載體等方面的研究和應用方面都十分的廣泛。

2、組織工程

由於膠原蛋白廣布於人體各組織中，系各組織中的重要成分並構成組織細胞外基質（Extracelluarmatrix，ECM），其性質是一種天然的組織支架材料。

從臨床應用的角度，人們用膠原蛋白製成各種各樣的組織工程支架，如皮膚、骨組織、氣管和血管支架等。

然而以膠原本身而言就有兩大類，即純膠原制備的支架和與其它成分復合而成的復合物支架。

純膠原蛋白組織工程支架具有生物相容性好、易加工、可塑性並能促進細胞黏附、增殖等優點，但也有膠原蛋白的力學性能差，在含水時難以塑形，無法支撐組織重建等不足。

其次在修復處的新生組織會產生各種各樣的酶，將膠原蛋白水解，導致支架崩解，而採用交聯或復合的方式能改善與提高。

現已成功地將膠原蛋白基生物材料用於人工皮膚、人工骨、軟骨移植和神經導管等組織工程產品。

有人用嵌入軟骨細胞的膠原蛋白凝膠來修復軟骨缺陷並嘗試用上皮、內皮和角膜細胞附在膠原蛋白海綿以適應角膜組織。

還有人混合自體同源的間葉細胞中的莖狀細胞和膠原蛋白凝膠製作肌腱用於腱後修復。

以膠原蛋白為基質作真皮輔以上皮成分構成的組織工程人工皮膚葯物緩釋膠以膠原蛋白為主要成分的給葯系統應用非常廣泛，可以把膠原蛋白水溶液塑造成各種形式的給葯系統。

如眼科方面的膠原蛋白保護物、燒傷或創傷使用的膠原海綿、蛋白質傳輸的微粒、膠原蛋白的凝膠形式、透過皮膚給葯的調控材料以及基因傳輸的納米微粒等。

此外，還可作為組織工程包括細胞培養系統的基質、人工血管和瓣膜的支架材料等。

3、燒傷

自體皮膚移植一直是治療二度和三度燒傷的全球標准方法，然而對於嚴重燒傷的病人，缺少合適的可移植的皮膚成了最嚴峻的問題。

有人利用生物工程技術通過嬰兒皮膚細胞培育出嬰兒皮膚組織，這種膠原蛋白組織在沒有自體移植的情況下，在3周到18個月不等的時間里可治癒不同程度的燒傷，而且新長出的皮膚也很少表現出肥大增生和抗性。

還有人用人工合成的聚-DL-乳酸-羥基乙酸（PLGA）和天然膠原蛋白來培育三維的人皮膚纖維原細胞。

結果表明：細胞在合成網狀物上生長更快，而且內外幾乎同步生長，增殖細胞和分泌的胞外基質更均一，把這種纖維植入無皮的大鼠背部，2周後就長出了真皮組織，4周後就長出了上皮組織。

4、美容

膠原蛋白由動物皮提取，皮中除膠原蛋白外還含有透明質酸、硫酸軟骨素等蛋白多糖，它們含有大量極性基團，是保濕因子，且有阻止皮膚中的酪氨酸轉化為黑色素的作用，故膠原蛋白有純天然保濕、美白、防皺、祛斑等作用，可廣泛應用於美容用品中。

膠原蛋白的化學組成、結構賦予了它是美容的基礎。膠原蛋白與人體皮膚膠原的結構相似，為非水溶性纖維狀含糖蛋白質，分子中富含大量氨基酸和親水基，具有一定的表面活性和很好的相容性，同時由於其分子中含有大量的羥基，因此它有著相當好的保濕作用。

在相對濕度70%時，仍可保持其自身重量45%的水分。試驗證明：0.01%的膠原蛋白純溶液就能形成很好的保水層，供給皮膚所需要的全部水分。

隨著年齡的增長，成纖維細胞的合成能力下降，若皮膚中缺乏膠原蛋白，膠原纖維就會發生聯固化，使細胞間粘多糖減少，皮膚便會失去柔軟、彈性和光澤，發生老化，同時真皮的纖維斷裂、脂肪萎縮、汗腺及皮脂腺分泌減少，使皮膚出現色斑、皺紋等一系列老化現象。

將其作為活性物質用於化妝品中時，後者可以擴散到皮膚的深層，其含有的酪氨酸與皮膚中的酪氨酸競爭，而與酪氨酸酶的催化中心結合。

從而抑制黑色素的產生，使皮膚中的膠原蛋白活性增強，保持角質層水分以及纖維結構的完整性，促進皮膚組織的新陳代謝，對皮膚產生良好的滋潤保濕、消皺美容作用。

早在20世紀70年代初，美國就率先推出注射用牛膠原，用於祛斑除皺紋及修復瘢痕。

不過在化妝品中，單純用作營養性護膚類原料通常要求分子量在2KD以下，以讓水解膠原能滲透入皮膚內。而護發類化妝品除要求水解膠原具有保濕性以外，還應具有一定的成膜性，因此，水解膠原的分子量要求會更高。

5、食品

膠原蛋白亦可用於食品，早在十二世紀Bingen 的 St.Hilde-gard 就描述了利用小牛的軟骨湯作為葯物來治療關節疼痛，在相當長的一段時間里，含膠原的一些產品被人們認為對關節是很有益處的。

因為它具有適用於食品的一些屬性：食用級通常外觀為白色，口感柔和，味道清淡，易消化。可以降低血甘油三酯和膽固醇，並可以增高體內某些缺乏的必需微量元素使之維持在一個相對的正常范圍之內，它是一種理想的降血脂食品。

此外，有研究表明，膠原蛋白可以協助排除體內的鋁，減少鋁在體內的聚集，降低鋁質對人體的危害，並一定程度上促進指甲和頭發的生長。Ⅱ型膠原是關節軟骨中的主要蛋白，因而是潛在的自身抗原。

口服後能誘導T細胞產生免疫耐受，從而抑制T細胞介導的自身免疫性疾病。

膠原多肽是膠原或明膠經蛋白酶等降解處理後製得的具有較高消化吸收性、分子量約為2000～30000的產物，不具有明膠的凝膠性能，市場上銷售的膠原多為膠原多肽。

膠原的一些品質使得它在許多食品中用作功能物質和營養成分具有其它替代材料難以比擬的優點：

膠原大分子的螺旋結構和存在結晶區使其具有一定的熱穩定性；膠原天然的緊密的纖維結構使膠原材料顯示出很強的韌性和強度，適用於薄膜材料的制備。

由於膠原分子鏈上含有大量的親水基團，所以與水結合的能力很強，這一性質使膠原在食品中可以用作填充劑和凝膠；膠原在酸性和鹼性介質中膨脹，這一性質也應用於制備膠原基材料的處理工藝中。

膠原蛋白粉可直接加入到肉製品，以影響肉類的嫩度和肉類蒸煮後肌肉的紋理。研究表明，膠原蛋白對原料肉和烹飪肉質地的形成非常重要，膠原蛋白含量越高，肉的質地越硬。

像魚肉的嫩化被認為與V型膠原蛋白降解有關，其肽鍵的破壞引起的細胞外周膠原纖維的裂解被認為是肌肉嫩化現象的主要原因。

通過破壞膠原蛋白分子內的氫鍵，使原有的緊密超螺旋結構破壞，形成分子較小、結構較為鬆散的明膠，既可改善肉質的嫩度又可提高其使用價值，使其具有良好的品質，增加蛋白質含量，既口感好又有營養。

日本還開發出了動物膠原蛋白為原料經膠原蛋白水解酶水解、調制開發出新型調味品和清酒，不但有特殊的風味，還能補充部分氨基酸。

隨著各類香腸製品在肉製品中所佔的比例越來越大，天然的腸衣製品嚴重缺乏。

研究人員正致力於替代品的開發，以膠原蛋白質為主要的膠原腸衣本身是營養豐富的高蛋白物質，在熱處理過程中隨著水分和油脂的蒸發與溶化，膠原幾乎與肉食品的收縮率一致，而其他的可食用包裝材料還沒有被發現具有這種品質。

另外，膠原蛋白本身具有固定化酶的功能，具有抗氧化性，可以改善食品的風味和質量。產品應力與膠原蛋白含量的多少成正比，而應變則成反比。

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膠原蛋白對的分類：

膠原蛋白是一類蛋白質家族，已至少發現了30餘種膠原蛋白鏈的編碼基因，可以形成16種以上的膠原蛋白分子。

根據其結構，可以分為纖維膠原、基膜膠原、微纖維膠原、錨定膠原、六邊網狀膠原、非纖維膠原、跨膜膠原等。

根據它們在體內的分布和功能特點，可以將膠原分成間質膠原、基底膜膠原和細胞外周膠原。

間質型膠原蛋白分子占整個機體膠原的絕大部分，包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原蛋白分子，Ⅰ型膠原蛋白主要分布於皮膚、肌腱等組織，也是水產品加工廢棄物（皮、骨和鱗）含量最多的蛋白質，佔全部膠原蛋白含量的80-90%左右，在醫學上的應用最為廣泛。

Ⅰ型膠原在魚類膠原中一個最顯著的的特點是熱穩定性比較低，並呈現有魚種的特異性。

Ⅱ型膠原蛋白由軟骨細胞產生；基底膜膠原蛋白通常是指Ⅳ型膠原蛋白，其主要分布於基底膜。

細胞外周膠原蛋白通常中指Ⅴ型膠原蛋白，在結締組織中大量存在。

按功能，可將膠原分為兩組，第一組是成纖維膠原，包括第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅺ、ⅩⅩⅣ和ⅩⅩⅦ型膠原；其餘是第二組，非成纖維膠原。

非成纖維膠原的α- 鏈既含有三螺旋域（膠原域，COL），還含有非三螺旋域（非膠原域，NC），其中成纖維膠原約占膠原總數的90%。

㈢ 膠原蛋白的提取分離

由於膠原是細胞外間質成分，在體內以不溶性大分子結構存在，並與蛋白多糖、糖蛋白等結合在一起，因此膠原的制備包括材料的選擇、預處理、酸鹼酶鹽水法提取、不同類型膠原的分離和純化。 除膠原蛋白外，動物骨中還含有油脂、多種礦物質和其他雜質，因此在被用於提取膠原蛋白之前必須進行預處理。先剔除動物骨上殘留的肉質和肌腱等雜物，粉碎後用正丁醇或正己烷萃取出骨油。最後除去骨中無機物以提高膠原蛋白的得率。除去骨中的礦物質可用稀酸或EDTA溶液。有人用原料用5倍質量的1.0moL/LHCL脫鈣處理2d，用正乙烷脫脂後再用胃蛋白酶酶解，在加酶量150U/g，pH值1.7，37℃條件下處理120min，然後在固液比1∶6的情況下抽提5h，在此條件下，提取率可達18%；還有人用EDTA溶液（pH7.4）浸泡骨料5d，可有效脫去骨料中的羥基磷灰石。
膠原蛋白的提取一般有三種方法：一是高壓輔助的物理方法；二是用溶劑預處理結合低溫或熱水抽提的化學方法，根據溶劑的不同，可分為熱水浸提法、酸法、鹼法、鹽法；三是用酶的生物化學法。一般來說，高壓輔助和熱水抽提針對明膠的提取，而低溫抽提和酶法針對膠原的提取，但其基本原理都是根據膠原蛋白的特性改變蛋白質所在的外界環境，把膠原蛋白從其他蛋白質中分離出來。
在實際提取過程中，不同提取方法之間往往相互結合，可以得到較好的提取效果。採用超高壓處理系統對原料給予高壓處理一段時間，使其組織結構和膠原蛋白的三股螺旋結構發生鬆弛、變性，便於分離提取。 酸法提取是利用一定濃度的酸溶液在一定的條件下提取膠原蛋白，主要採用低離子濃度酸性條件破壞分子間鹽鍵和希夫鹼，而引起纖維膨脹、溶解，採用酸法提取的膠原蛋白通常成為酸溶性膠原蛋白。酸溶解法可將沒有交聯的膠原分子溶解出來，也可溶解含有醛胺類交聯鍵的膠原纖維，然後釋放到溶劑中。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用低溫酸法提取的膠原最大程度的保持了其三螺旋結構，適用於醫用生物材料及原料的制備。通常的做法是將適當濃度的酸液按一定料液比加入到經過預處理的骨粉中，於0～25℃攪拌提取一定時間。在採用酸法進行膠原蛋白的提取時，注意提取溫度不宜過高，以免膠原蛋白的生物活性發生破壞。取樣經前處理後，勻漿在低溫下用酸浸提，離心即可得酸溶性膠原蛋白（acid-soluble collagen，ASC）。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸、磷酸、甲酸、乙酸、蘋果酸、檸檬酸等，但大多數研究集中於乙酸抽提，像Maria Sadowska等用0.5mol/L檸檬酸在室溫下提取骨膠原蛋白，其提取率略低於乙酸提取。檸檬酸因不產生顏色和異味得以廣泛使用於食品工業的膠原蛋白的提取。
酸法處理時，反應強烈，水解徹底，多生成氨基酸混合物，而且使用酸提取時，根據酸濃度、水解溫度、水解時間等條件的不同，可以得到分子量不均的膠原水解物。但是在即使中等濃度酸徹底水解過程中色氨酸也會全部被破壞，絲氨酸和酪氨酸也會部分被破壞，且設備腐蝕嚴重。因此，酸法溶出生物醫用膠原要准確控制酸度、溫度、時間等影響因素。由於各種不足，酸法很少單獨使用，一般和酶法配合。比如以豬皮為原料，在檸檬酸(pH8.6)和胃蛋白酶協同下提取膠原蛋白。在處理後的豬皮中加0.05moL/L含有胃蛋白酶的檸檬酸溶液（pH2.5-3）處理一段時間，然後再用NaCL鹽析，最後提取率為12.35%，提取物保持了完整三股螺旋結構的I型膠原蛋白。還有人以雛雞胸軟骨為原材料，在0.5moL/L醋酸條件下經胃蛋白酶多次消化，在4℃，20000r條件下離心20min，最後應用DEAE-Sephadex A-50進行離子交換層析，之後透析，再用NaCL鹽析，最後得到純化的膠原蛋白Ⅱ型。 鹼法提取即利用一定濃度的鹼在一定的外界條件下提取膠原蛋白，鹼處理法中常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等，用氫氧化鈉浸提時效果較好。一般的是把樣品勻漿後，用鹼溶液多次溶脹後，再離心提取。但由於易引起蛋白質變性，如膠原肽鍵水解，含羥基、疏基的氨基酸全部被破壞；所得產物等電點pH值較低，天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉變為天冬氨酸和谷氨酸，得到的水解產物分子量較在酸性溶液中比低等問題，若比較嚴重的話，還會產生 D、L-型氨基酸消旋混合物，若D型氨基酸含量高過L 型氨基酸，則會抑制L-型氨基酸的吸收，有些D型氨基酸有毒，甚至有致癌、致畸和致突變的作用。而且鹼法提取的含量較低，用氫氧化鈉從魷魚皮中提取鹼溶性膠原蛋白，其得率只有3%（以濕基計）。所以，若想提取結構完整、使用安全的膠原蛋白，很少採用此方法。有關單獨採用鹼法提取膠原蛋白的報道不多，一般是鹼法提取和酸法提法結合使用。比如在4℃條件下，魚骨用0.1moL/L的NaOH浸泡6h，再用2.5%NaCl浸泡6h去除雜蛋白，用10%的異丙醇溶液去除脂肪，0.1moL/L的檸檬酸浸泡3d，最後得到無色無味的膠原蛋白，提取率為11.87%。
注意，無論酸法或鹼法，均可有效地提取膠原蛋白，有人分別採用醋酸- 鹽酸的混合酸液（pH3.0）和NaOH溶液（pH12.0）提取骨膠原蛋白，提取率基本相當。但是，這兩種方法提取膠原蛋白不僅容易影響膠原蛋白的生物活性，而且提取後產生的酸性或鹼性廢液必須進行適當處理，以避免對環境造成污染。 酶法提取是指可溶性膠原和酸溶性膠原被提取後，需用一些蛋白酶，如膠原酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等水解，得到不同的酶促溶性膠原蛋白。所使用的蛋白酶主要分3種：動物蛋白酶（如胰蛋白酶，胃蛋白酶），植物蛋白酶（如木瓜蛋白酶，菠蘿蛋白酶），微生物蛋白酶（如鹼性蛋白酶，中性蛋白酶）。在對酶法水解膠原蛋白的研究中，以鹼性蛋白酶應用最多。
將膠原進行限制性降解，即將末端肽切割下來，由於膠原肽鏈間的共價鍵都是通過分子末端肽里的賴氨酸或羥賴氨酸的相互作用形成的，末端肽被切下後，含三螺旋結構的主體部分可溶於稀有機酸而被提取出來。用酶處理，可以水解掉膠原纖維蛋白的末端肽，提高膠原蛋白的產率；而且還不會破壞膠原蛋白的三股螺旋結構，保持其特性。影響酶提取的因素有很多，如酶濃度、酶與底物的比例、酶解時間、酶解溫度、pH值以及料液比等。在實際操作中，大多數採用酶復合法提取膠原蛋白，較多的是使用胃蛋白酶提取，有機酸多為乙酸。
酶解膠原蛋白的工藝主要分為單酶水解法和多酶水解法。多酶水解法又分為混合酶水解法（比如牛胰蛋白酶，鏈黴菌蛋白酶，芽孢桿菌蛋白酶混合）和分步酶水解法，酶法提取皮膠原具體實驗工藝及條件的選取通常應考慮要開發的產品對分子量的要求，要得到分子量較小的膠原多肽一般採用多酶水解法。影響酶解效果的因素主要有：酶的種類、加酶量、酶解溫度、酶解時間、pH值及料水比。採用酶法提取骨料中的膠原蛋白，既能有效縮短提取時間，又能獲得具有良好生物活性的膠原蛋白，而且對環境的污染也較小。膠原蛋白不易被普通蛋白酶水解，但能被動物膠原酶斷裂，斷裂的碎片自動變性後可被普通蛋白酶水解。胃蛋白酶水解膠原蛋白的適宜條件為pH 1.65～1.70、溫度37℃。
有人以豬骨為原料，用蛋白酶的酶解反應代替傳統制膠工藝，對骨膠原的酶解反應與酶法制膠工藝進行了試驗研究。結果表明：以胃蛋白酶對骨膠原的提取率最高（46.14%），其次是胰蛋白酶（43.42%），接下來是中性蛋白酶（30.14%），最後是鹼性蛋白酶（21.15%）。並且通過單因素和正交試驗對胃蛋白酶酶解反應中各主要影響因素進行了優化。試驗結果表明，胃蛋白酶提取的最優條件是，胃蛋白酶的濃度是1%，在pH2.0的條件下酶解48h，然後在濃度為10%（w/v）的NaCL溶液中鹽析24h，最後骨膠原的回收率為64.77%，骨膠原的提取率為49.75%。還有人用胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白，分別在水解0、2、6、10、14、18、22、26h時對四種不同胃蛋白酶用量（分別為1%、2%、2.5%、3%）的試樣取樣檢測，採用一階HILL方程模擬胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白的進程以及胃蛋白酶水解速率的衰減過程，最後得出2%的胃蛋白酶用量和6-7h的水解時間提取率最大。還有人用以新鮮豬皮為原料，在50-52℃的條件下用胰酶進行水解，在酶用量為 5000：1～10000：1，pH值為9，反應2－3h，原料：水為1：2的條件下酶解。結果表明：總蛋白質的提取率≥80%。
採用酶法提取膠原蛋白時，必須嚴格控制提取條件。首先，酶作用時間必須適當。如果時間過短，膠原蛋白就不能充分釋放到提取液中，影響提取率；如果酶作用時間過長，膠原蛋白會水解過度，產生過多的苦味小分子低聚肽，不僅會增加分離純化的難度，也會影響膠原蛋白的功能特性和生物活性。其次，酶解溫度要適宜。溫度過低，酶的作用效果不明顯；溫度過高會引起酶的失活和膠原蛋白的變性。據報道，當介質pH略低於中性時，膠原蛋白的變性溫度為40～41℃，當介質pH為酸性時，膠原蛋白的變性溫度為38～39℃，而且魚皮膠原蛋白的變性溫度要比豬皮膠原蛋白的變性溫度低7～12℃。所以，如果要使提取的膠原蛋白具有良好的生物活性，在提取過程中應使提取溫度低於變性溫度。第三，需選用適當的酶。一般從陸生哺乳動物組織中提取膠原蛋白時，採用胃蛋白酶在其最適作用溫度下進行提取是合理的，但對於魚類等水生動物，由於其膠原蛋白的變性溫度比陸生哺乳動物低，因此許多蛋白酶便不適用，如果在這些酶的最適作用溫度下提取可能會破壞膠原蛋白的某些功能特性和生物活性。採用酶法提取膠原蛋白及其多肽的研究主要是從動物皮及其加工副產物中，應用酶法從動物骨中提取膠原蛋白及其多肽報道較少。 指使膠原分子內部和分子間通過共價健結合提高膠原纖維的張力和穩定性的方法。該法又分為物理方法、化學方法和低溫等離子體法，生物學方法；其中物理方法、化學方法是最常用的交聯改性方法，生物學方法改性膠原蛋白主要在研究有關動物老化的生命現象中涉及，在研製膠原基生物醫學材料中少見報道。
物理方法
通過物理手段對膠原蛋白改性有紫外線照射、重度脫水、λ射線照射和熱交聯等方法。膠原溶液如被紫外線等照射，將在分子間產生交聯，粘度增加，生成凝膠。常用的紫外線交聯膠原膜的方法是將膠原膜放在鋁箔上，距離254 nm紫外燈20 cm高度，照射1～5 h。對紫外線照射的膠原膜進行力學性能和膠原酶試驗表明：交聯膠原膜的萎縮溫度Ts和抗膠原酶解的能力均顯著高於未交聯膠原膜。
重度脫水也是膠原蛋白物理改性中常使用的方法，該法是通過脫水導致膠原分子間交聯，從而增加變性溫度，改善膠原的性能。改性後膠原膜生物相容性提高，降低了水溶性，影響了膜與成骨細胞的生物相容性。物理方法改性原蛋白的優點是可避免外源性有毒化學物質進入膠原內，缺點是膠原膜交聯度低，且難以獲得均勻一致的交聯。
化學方法
化學方法比物理方法改性交聯度高，且能獲得均勻一致的交聯，對調節、控制膠原的各性質均有效。已廣泛應用於各種化學試劑交聯膠原，以提高其交聯度、力學性能及生物相容性。化學改性法具體又可分為使用化學試劑交聯、側鏈的修飾、生理活性物的固定化三種方法。
化學試劑交聯法中常用的化學交聯劑有戊二醛、己異二氰酸酯、碳化二亞胺、疊氮二苯基磷等，其中戊二醛是應用最廣泛的試劑，大量實驗證明：戊二醛能提供有效交聯，但有細胞毒性，且其用量難以控制。另外，隨著交聯度的增加，吸水能力和膨脹度卻會降低。醯基疊氮化物、聚環氧化物或京尼平交聯等，不會引入明顯的毒性，且可獲得理想的交聯效果。所見報道中，多使用單一交聯劑對膠原蛋白交聯改性，但也有使用混合交聯劑的，如為了解決人工心臟瓣膜晚期鈣化問題，篩選出環氧丙烷化學改性戊二醛處理生物瓣的方法，可明顯減低瓣膜組織膠原蛋白末端游離羧基含量。動物實驗表明，經改性後的瓣膜組織能保持較好的組織穩定性和機械抗張強度、免疫原性測試為陰性，符合臨床應用。
側鏈修飾就是對膠原分子側鏈的氨基和羧基進行化學修飾，改善電荷分布，使膠原獲得新的特性，例如將膠原氨基丁二醯化，可變成負電荷豐富的膠原。與未修飾膠原蛋白相比血小板粘附能，血纖維蛋白形成能都弱，有抗栓性；然而如將膠原羧基甲基化獲得的正電荷豐富的膠原，生理條件下血小板粘附能、活化能都高。與交聯改性相比，在生物材料領域，利用側鏈修飾對膠原改性所做的工作還較少。
化學方法雖然可獲得均勻一致的交聯，但存在著引入外源有毒試劑，殘留試劑難清除等缺點。一些報道表明，低溫等離子體技術改性膠原或膠原復合膜可使材料表面引入不同基團，改變材料表面化學組分和結構，從而改變材料的特性，如使之更具有細胞識別位，提高表面能，改善表面極性等。 膠原單獨使用，物理機械性能差（這幾乎是天然材料共有的弱點），性能單一，且因有親水性強，在體內易被膠原酶降解等不可避免的弱點限制了它的應用。但如將膠原與其它物理、化學性質不同的合成或天然高分子共混，組成一種多相固體材料，在性能上膠原與其它高分子互相補充，膠原基「復合材料」的概念由此產生。
已見報道的與膠原共混的合成高分子有不可生物降解的聚甲基烯酸酯及丁烯酸酯、聚氨酯、聚醯胺和可生物降解的聚乙烯醇、聚乳酸、聚谷氨酸、聚乙醇酸等，20世紀80～90年代初最有代表性的是聚甲基丙烯酸羥乙酯（PHEMA）和聚乙烯醇與膠原共混，其報道集中於復合方法、復合機理、理化及生物學性能、材料表面和整體結構、表面修飾的方法和機理以及水凝膠的溶脹擴散等，尤其是水凝膠制備、作軟組織替代、葯物緩釋等。後來利用可生物降解的聚乳酸、聚乙醇酸、聚酸酐、聚谷氨酸、聚亞乙基四乙酸等與膠原共混改性制備可吸收外科縫線、組織工程支架材料（如組織引導再生材料）的相關研究相對增多。不過合成高分子與膠原蛋白共混復合一些問題，如尼龍等不降解高分子材料不能進行生理代謝，與膠原蛋白復合後只能用做皮膚的外層敷料不能永久代替皮膚，而聚谷氨酸等可生物降解材料，如果相對分子質量小則強度不夠，相對分子質量大難溶於水，溶解時還出現降解，影響材料的機械強度。
天然高分子材料中最具代表性的是天然蛋白質和天然多糖，多糖主要有軟骨素、HA（透明質酸）、殼聚糖、肝素等，多糖復合材料比較集中於可吸收性外科縫線、葯物釋放的載體、皮膚替代物、透析膜、止血劑、醫用引導組織再生材料、骨替代材料、組織培養系統的支架。

㈣ 誰知道0.2%Ⅱ型膠原酶和10%胎牛血清的怎麼配製

每 100mg 膠原酶加入 50ml 培養液中 攪拌
均勻 用 0.2 微米 微孔濾膜過濾分裝 -20 低溫冰箱保存

450mlDMEM+50mlFBS

㈤ sigma的膠原酶可以用PBS配製嗎

sigma的膠原酶不可以用PBS配製
需要用HBSS緩沖液（即hanks液）配製，沒有的話用DMEM也行
上述兩種都含有鈣離子，而膠原酶的活性是有賴於鈣離子的
所以sigma的膠原酶不可以用PBS配製

㈥ 膠原蛋白的用法用量是多少

膠原蛋白粉是補充膠原蛋白的有效產品之一。相信很多人都吃過膠原蛋白粉，但估計很多人都沒注意用法用量。下面由我為大家介紹膠原蛋白的具體用法用量，希望能幫到你。

膠原蛋白的用法用量

膠原蛋白粉是一種天然蛋白質，廣泛存在於動物的皮膚、骨、軟骨、牙齒、肌腱韌帶和血管中，是結締組織極重要的結構蛋白質，起著支撐器官、保護機體的功能。膠原蛋白粉相信很多人都吃過，但估計很多人都沒注意用法用量。剛開始補充膠原蛋白粉的用戶，建議每天吃2次，每次用2勺(5g)，在早上飯前空腹和晚上入睡前使用效果最好。二到三個皮膚生理周期後，可根據自身情況減少用量，每日不低於2勺(約5g)。如有特別美容需求或大量 體育運動 者每日可增至4勺(約10-12g)。堅持每日食用利於持續改善肌膚的健康問題。

膠原蛋白粉是從動物身上提取的，只要提取的原料沒有收到污染，那麼膠原蛋白是沒有什麼副作用的。不過，膠原蛋白粉服用要有一個度，因為很多的食物如魚、肉、蛋等均為生理酸性，重要酸性食物會使體液和血液中的乳酸、尿酸的含量增高，當有機酸沒能及時排除時，會侵蝕敏感的表層細胞，是皮膚失去彈性和細膩。因此在服用膠原蛋白粉也要有個度，並不是服用的越多效果越好。另外也要根據個人的吸收情況來服用，如果吸收效果不佳的話，過多的服用膠原蛋白粉也只能是造成不必要浪費。

膠原蛋白的美容應用

膠原蛋白由動物皮提取，皮中除膠原蛋白外還含有透明質酸、硫酸軟骨素等蛋白多糖，它們含有大量極性基團，是保濕因子，且有阻止皮膚中的酪氨酸轉化為黑色素的作用，故膠原蛋白有純天然保濕、美白、防皺、祛斑等作用，可廣泛應用於美容用品中。膠原蛋白的化學組成、結構賦予了它是美容的基礎。膠原蛋白與人體皮膚膠原的結構相似，為非水溶性纖維狀含糖蛋白質，分子中富含大量氨基酸和親水基，具有一定的表面活性和很好的相容性，同時由於其分子中含有大量的羥基，因此它有著相當好的保濕作用。在相對濕度70%時，仍可保持其自身重量45%的水分。試驗證明：0.01%的膠原蛋白純溶液就能形成很好的保水層，供給皮膚所需要的全部水分。

隨著年齡的增長，成纖維細胞的合成能力下降，若皮膚中缺乏膠原蛋白，膠原纖維就會發生聯固化，使細胞間粘多糖減少，皮膚便會失去柔軟、彈性和光澤，發生老化，同時真皮的纖維斷裂、脂肪萎縮、汗腺及皮脂腺分泌減少，使皮膚出現色斑、皺紋等一系列老化現象。將其作為活性物質用於化妝品中時，後者可以擴散到皮膚的深層，其含有的酪氨酸與皮膚中的酪氨酸競爭，而與酪氨酸酶的催化中心結合，從而抑制黑色素的產生，使皮膚中的膠原蛋白活性增強，保持角質層水分以及纖維結構的完整性，促進皮膚組織的新陳代謝，對皮膚產生良好的滋潤保濕、消皺美容作用。早在20世紀70年代初，美國就率先推出注射用牛膠原，用於祛斑除皺紋及修復瘢痕。

不過在化妝品中，單純用作營養性護膚類原料通常要求分子量在2KD以下，以讓水解膠原能滲透入皮膚內。而護發類化妝品除要求水解膠原具有保濕性以外，還應具有一定的成膜性，因此，水解膠原的分子量要求會更高。

膠原蛋白的食品應用

膠原蛋白亦可用於食品，早在十二世紀Bingen 的 St.Hilde-gard 就描述了利用小牛的軟骨湯作為葯物來治療關節疼痛，在相當長的一段時間里，含膠原的一些產品被人們認為對關節是很有益處的。因為它具有適用於食品的一些屬性：食用級通常外觀為白色，口感柔和，味道清淡，易消化。可以降低血甘油三酯和膽固醇，並可以增高體內某些缺乏的必需微量元素使之維持在一個相對的正常范圍之內，它是一種理想的降血脂食品。此外，有研究表明，膠原蛋白可以協助排除體內的鋁，減少鋁在體內的聚集，降低鋁質對人體的危害，並一定程度上促進指甲和頭發的生長。Ⅱ型膠原是關節軟骨中的主要蛋白，因而是潛在的自身抗原。口服後能誘導T細胞產生免疫耐受，從而抑制T細胞介導的自身免疫性疾病。膠原多肽是膠原或明膠經蛋白酶等降解處理後製得的具有較高消化吸收性、分子量約為2000～30000的產物，不具有明膠的凝膠性能，市場上銷售的膠原多為膠原多肽。

膠原的一些品質使得它在許多食品中用作功能物質和營養成分具有 其它 替代材料難以比擬的優點：膠原大分子的螺旋結構和存在結晶區使其具有一定的熱穩定性;膠原天然的緊密的纖維結構使膠原材料顯示出很強的韌性和強度，適用於薄膜材料的制備;由於膠原分子鏈上含有大量的親水基團，所以與水結合的能力很強，這一性質使膠原在食品中可以用作填充劑和凝膠;膠原在酸性和鹼性介質中膨脹，這一性質也應用於制備膠原基材料的處理工藝中。

膠原蛋白粉可直接加入到肉製品，以影響肉類的嫩度和肉類蒸煮後肌肉的紋理。研究表明，膠原蛋白對原料肉和烹飪肉質地的形成非常重要，膠原蛋白含量越高，肉的質地越硬。像魚肉的嫩化被認為與V型膠原蛋白降解有關，其肽鍵的破壞引起的細胞外周膠原纖維的裂解被認為是肌肉嫩化現象的主要原因。通過破壞膠原蛋白分子內的氫鍵，使原有的緊密超螺旋結構破壞，形成分子較小、結構較為鬆散的明膠，既可改善肉質的嫩度又可提高其使用價值，使其具有良好的品質，增加蛋白質含量，既口感好又有營養。日本還開發出了動物膠原蛋白為原料經膠原蛋白水解酶水解、調制開發出新型調味品和清酒，不但有特殊的風味，還能補充部分氨基酸。

㈦ 腫瘤細胞消化液中膠原酶、透明質酸、DNA酶配合什麼比例比較好膠原酶用哪個型的謝謝您的關注和回答

不同腫瘤組織 其中各種蛋白種類、比例各不相同，則相應消化酶的種類和比例也可適當改變，若要制備腫瘤懸液，個人推薦 先查找中英文文獻，參考文獻中的消化方法

㈧ 如何配置膠原酶2u/ml的膠原酶溶液，需要多少毫克膠原酶

梯度的配置一般高往低逐步稀釋，一般現配一個大濃度的儲備液你可以配1g/ml的，方法是稱取100g的樣品溶解後用100ml的容量瓶定容
50mg/ml的配置：量取5ml的1g/ml儲備液稀釋後，用100ml的容量品定容
40mg/ml：量取4ml的1g/ml儲備液稀釋後，用100ml的容量品定容
30mg/ml：量取3ml的1g/ml儲備液稀釋後，用100ml的容量品定容
,20mg/ml：量取2ml的1g/ml儲備液稀釋後，用100ml的容量品定容
10mg/ml：量取1ml的1g/ml儲備液稀釋後，用100ml的容量品定容
望採納，謝謝