i型膠原纖維用什麼溶解

『壹』 膠原蛋白1-3型和2型有何區別

一、存在位置不同

1、膠原蛋白1型：主要存在於成人皮膚、肌腱、骨組織。

2、膠原蛋白2型：主要存在於嬰兒皮膚或血管內膜、腸道。

3、膠原蛋白3型：主要存在軟骨、玻璃體、椎間盤等。

二、特點不同

1、膠原蛋白1型：I型膠原蛋白是相對堅硬的膠原蛋白，並呈現有魚種的特異性。

2、膠原蛋白2型：II型膠原蛋白獨特的高分子長鏈纖維結構使它在體內能形成膠原蛋白網路，並吸附各種蛋白多糖聚合物最終為組織提供抗拉張強度。

3、膠原蛋白3型：III型膠原不成熟、不穩定，彈性張力較低；III型膠原蛋白是具有彈性的膠原蛋白。

三、作用不同

1、膠原蛋白1型：膠原蛋白Ⅰ型較粗大，用於支撐皮膚硬度，使皮膚堅固。但是如果含量過多，則會使皮膚僵硬，創傷癒合後，也容易形成疤痕。

2、膠原蛋白2型：與皮膚損傷修復過程和修復質量緊密相關。

3、膠原蛋白3型：膠原蛋白III型較細小，用於支撐皮膚柔嫩度，使皮膚細膩和富有彈性。含量越高，越能使皮膚細膩柔嫩，創傷後III型膠原蛋白可以更好地讓傷口恢復，不容易留疤痕。

『貳』 膠原蛋白是液體比較好，還是顆粒葯丸還是粉

20歲不必每天都吃，因為體內膠原蛋白還不會過量流失。 要吃也吃粉劑，液體和膠囊都不要考慮。 膠囊含量低，液體添加物過多價格貴。 粉末找國產的就可以，關注一下廠家的資質，有無QS認證等等，同時關注相關的膠原蛋白氨基酸檢測報告和分子檢測報告。 氨基酸含量百分之99.5以上，分子量在1000-3000道爾頓的多肽是最好被人體腸道吸收的口服膠原蛋白。

『叄』 膠原蛋白分為哪幾類

膠原蛋白是一類蛋白質家族，已至少發現了30餘種膠原蛋白鏈的編碼基因，可以形成16種以上的膠原蛋白 分子。

根據其結構可分為纖維膠原、基底膜膠原、微纖維膠原、錨定膠原、六角網狀膠原、非纖維膠原、跨膜膠原等。

根據膠原在體內的分布和功能，膠原可分為間質膠原、基底膜膠原和細胞周圍膠原。

類型的間質膠原蛋白分子身體大部分的膠原蛋白,包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原蛋白分子,Ⅰ型膠原蛋白主要分布在皮膚,肌腱,和水產品加工廢棄物(皮膚、骨骼和大小),其中一個最豐富的蛋白質佔80 - 90%的總膠原蛋白含量,使用最廣泛的葯物。

Ⅰ型膠原在魚類膠原蛋白,最引人注目的一個特點是熱穩定性較低,還有物種特異性。Ⅱ型膠原蛋白由軟骨細胞產生;基底膜膠原類型,通常被稱為Ⅳ膠原蛋白,它主要分布在基底膜;周細胞外膠原蛋白通常Ⅴ中指類型膠原蛋白,在結締組織比比皆是。

根據膠原蛋白的功能可以分為兩組,第一組膠原纖維,包括第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,Ⅺ,ⅩⅩⅣ,ⅩⅩⅦ膠原蛋白類型;其餘是第二組，非纖維性膠原蛋白。非成纖維膠原的-鏈同時包含三個螺旋結構域(COL)和非三螺旋結構域(NC)，其中成纖維膠原約占膠原總量的90%。

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膠原蛋白相容性：

生物相容性是指膠原蛋白與宿主細胞和組織之間良好的相互作用。膠原本身是細胞外基質的骨架，其三股螺旋結構和交聯形成的纖維或網路可以錨定和支持細胞，為細胞增殖和生長提供適宜的微環境。

作為新組織的框架被吸收之前,作為一個主機的一部分被吸收和融入主機後,他們有良好的與細胞周圍的基質相互作用,相互影響、協調和參與細胞的正常生理功能和組織作為一個整體。

如海綿狀I型膠原與兔脂肪幹細胞具有良好的體外生物相容性，可為組織工程種子細胞的生長提供適宜的三維空間，可作為組織工程種子細胞的載體材料。

膠原蛋白可降解性：

膠原蛋白可被特定的蛋白酶生物降解。由於膠原蛋白具有緊密而牢固的螺旋結構，大多數蛋白酶只能切斷其側鏈，只有膠原酶、彈性酶等特異性蛋白酶才能在特定條件下降解膠原蛋白，破壞膠原肽鍵。

膠原蛋白肽鍵一旦斷裂，其螺旋結構就會被破壞，完全水解成小分子多肽或氨基酸，進入血液循環系統，被機體再利用或代謝。生物降解性是利用膠原蛋白作為器官移植材料的基礎。

『肆』 又名白纖維的纖維是

白纖維是膠原纖維。

膠原纖維是真皮中的主要成分，占真皮全部纖維質量的95%-98%。新鮮的膠原纖維呈白色，故又稱白纖維。

膠原纖維在三種纖維中數量最多，在HE染色切片中呈嗜酸性，粗細不等，直徑0.5~20um，呈波浪形，有分支並交織成網，膠原纖維的生化成分為I型膠原蛋白。

膠原蛋白由成纖維細胞分泌，於細胞外聚合成膠原原纖維，在再經少量黏合成膠原纖維。

(4)i型膠原纖維用什麼溶解擴展閱讀：

膠原纖維形成的基本過程如下：

1、細胞內合成前膠原蛋白分子

成纖維細胞攝取合成蛋白質所需的氨基酸，包括脯氨酸、賴氨酸和甘氨酸，在粗面內質網的核糖體上按照特定的膠原mRNA的鹼基序列，合成前α-多肽鏈。

後者邊合成邊進入粗面內質網腔內，並在羥化酶的作用下，將肽鏈中的脯氨酸和賴氨酸羥化。經羥化後，三條前α-多肽鏈互相纏繞成繩索狀的前膠原蛋白分子。

溶解狀態的前膠原蛋白分子，兩端未纏繞，呈球狀構型，在粗面內質網腔內或轉移到高爾基復合體內加入糖基後，分泌到細胞外。

2、原膠原蛋白分子的細胞外聚合

細胞外的前膠原蛋白分子，在肽內切酶的作用下，切去分子兩端球狀構形部分，形成原膠原蛋白分子。原膠原蛋白分子平行排列聚合成膠原原纖維。

聚合時，相互平行的相鄰分子錯開1／4分子長度，同一排的分子，首尾相對並保持一定距離，聚合成束，於是形成具有64nm周期橫紋的膠原原纖維。聚合時，分子內、分子間的化學基因進行縮合、交聯，增加原纖維的穩固性。若干膠原原纖維經糖蛋白粘合成粗細不等的膠原纖維。

『伍』 臨床醫學綜合輔導：積雪草酸抑制HSCT6細胞Ⅰ型膠原蛋白表達

【摘要】 目的：研究外源性TGFβ對肝星狀細胞系（HSCT6）的激活作用，以及積雪草酸抑制HSCT6細胞Ⅰ型膠原蛋白合成的葯理作用。 方法：用LDH和MTT實驗測定積雪草酸對HSCT6細胞的細胞毒性和細胞增殖的影響。 檢測HSCT6細胞受不同劑量和不同時間TGFβ刺激後表達Ⅰ型膠原蛋白的劑量和時間。 以不同劑量的積雪草酸作用於TGFβ活化的HSCT6細胞，提取細胞總蛋白，以Western Blot方法檢測積雪草酸對TGFβ活化的HSCT6細胞Ⅰ型膠原蛋白表達的影響。 結果：TGFβ刺激HSCT6細胞表塵敗達Ⅰ型膠原蛋白的劑量為1 ng/mL，時間24 h. 10～30 μmol/L積雪草酸可以抑制TGFβ誘導的HSC細胞Ⅰ型膠原蛋白表達。 結論：外源性TGFβ可激活HSCT6細胞表達Ⅰ型膠原蛋白；積雪草酸抑制HSCT6細胞Ⅰ型膠原蛋白表達。
【關鍵詞】 積雪草酸； Ⅰ型膠原蛋白； HSCT6細胞； 轉化生長因子β

0引言

傳統中葯積雪草具有促進傷口癒合和抑制瘢痕增生葯效［1-2］。 新近的研究表明積雪草能夠抑制瘢痕組織來源的成纖維細胞的增殖和纖維蛋白的合成［2］。 肝星狀細胞在肝纖維化過程中起著至關重要的作用。 本研究以積雪草酸作用於SV40病毒大T抗原轉化的肝星狀細胞（HSCT6），研究積雪草酸對HSCT6細胞膠原蛋白合成的影響。

1材料和方法

1.1材料

積雪草酸（SIGMA， Cat： 546712）， 黃棕色粉末， 無臭， 味苦。 分子式為C48H78O5， 熔點325℃～330℃，不溶於水，溶搭飢於二甲亞碸（DMSO）， 儲存液濃度20 mmol/L. TGF β1（R&D Systems， Cat 240B），儲存液濃度10 mg/mL. HSCT6由紐約Mount Sinai醫學院 Friedmen教授贈送，維持培養在低糖型DMEM（Invitrogen）培養基中，添加10 g/L青鏈黴素（Invitrogen）和100 mL/L胎牛血清（Hyclone）。 1×105細胞2.5 mL鋪6孔培養板， 50 mL/L CO2， 37℃ 培養24 h，換含2 mL/L胎牛血清DMEM繼續培養24 h. TGFβ劑量實驗組分別加入0.1， 0.5， 1， 2， 5 ng/mL TGFβ，培養24 h後收取細胞蛋白；TGFβ時間實驗中各組均同樣加入1 ng/mL TGFβ，分別在0， 6， 1， 24， 48 h收取細胞蛋白；積雪草酸實驗分別加積雪草酸 0， 5， 10， 20， 30 μmol/L，2 h後除空白對照孔外，各孔加1 ng/mL TGFβ，24 h後提取細胞蛋白。

1.2方法

1.2.1乳酸脫氫酶細胞毒性實驗（LDH）派枝顫

LDH試劑盒購自SIGMA公司。 HSCT6細胞維持培養在100 mL/L胎牛血清、10 g/L青鏈黴素的DMEM中。 1×105 HSCT6鋪96孔板，細胞連續性達70％，吸棄上清，無血清DMEM 200 μL 洗2次。 2 mL/L胎牛血清DMEM中加入積雪草酸或DMSO，濃度分別為2.5， 5， 10， 20， 30， 40， 60， 80 μmol/L，200 μL加入細胞培養孔， 20 g/L Triton100作陽性對照，2 g/L胎牛血清DMEM作陰性對照，每劑量組各為3孔，37℃，50 mL/L CO2培養24 h. 將每孔上清吸出置另一96孔板相應孔，2000 r/min， 5 min待測。 將原各孔中殘余液體吸干凈，加入含20 g/L Triton100的DMEM 200 μL， 37℃，50 mL/L CO2培養30 min，使細胞裂解，2000 r/min， 5 min. 按試劑盒操作說明檢測上清中以及細胞內的LDH，以490 nm波長測定A值，LDH釋放率=A上清/（A上清+A細胞內）×100%.

1.2.2細胞增殖活性實驗（MTT）

HSCT6細胞培養方法以及積雪草酸處理濃度和對照組的設置均與LDH檢測方法中描述的相同。 MTT檢測試劑購自Promega公司。 加入MTT染液在37℃培養4 h， 加入溶解液室溫過夜，測定A570 nm/A650 nm雙波長的吸光度。

1.2.3蛋白質提取及定量用RIPA（10 g/L Nonidet P40， 1 g/L SDS， 1 mmol/L PMSF， 5 g/L sodium deoxycholate， 1 mmol/L sodium orthovanadate， 10 mmol/L sodium fluoride in PBS）

細胞蛋白裂解液250 μL，將6孔板每孔中的細胞蛋白收集至1.5 mL離心管管中，超聲粉碎500 W， 3 s×6次，以4℃， 10 000 r/min離心10 min，收取上清。 細胞蛋白濃度測定按照BioRad Laboratories蛋白測定試劑盒（Cat5000113）說明書來操作。 用RIPA裂解液將蛋白調節為一致濃度後，加入等體積的2×SDS上樣緩沖液（100 mmol/L Tris.HCl， 40 g/L SDS，200 g/L甘油，2 g/L bromophenol blue）。 100℃蛋白變性5 min備用。

1.2.4免疫印記40 mL/L積層膠，100 mL/L分離膠，總蛋白20 μg的樣本，加樣至100 mL/L SDSPAGE中電泳100 V，90 min. 然後將蛋白轉移至PVDF膜，150 V，90 min. 轉膜後TBST洗膜。 以50 mL/L脫脂奶粉TBST封閉液室溫下封閉60 min；TBST洗膜。 加入適當濃度的一抗孵育，4℃輕搖過夜。 TBST洗膜：加入適當濃度的結合HRP的二抗（1∶10 000至1∶30 000）及HRPantibiotin二抗（1∶5000）孵育，室溫下輕搖60 min. ECL或ECL plus顯影1 min後，在暗室中進行曝光2 s~15 min.

2結果

2.1積雪草酸對HSCT6細胞毒性不同濃度組與正常對照組比較，LDH釋放率在30 μmol/L以下時無顯著差異。 40 μmol/L以上時有差異（F=5.21， P<0.05， 圖1）。

2.2積雪草酸對HSCT6細胞的增殖不同濃度組與正常對照組比較，在30 μmol/L以下時，對細胞增殖無增加和抑製作用。 40 μmol/L以上時顯著抑制細胞增殖（F=49.04， P<0.05，圖2）。

2.3TGFβ增加HSCT6細胞I 型膠原蛋白表達的時間和劑量1 ng/mL TGFβ作用HSCT6細胞24 h，Ⅰ型膠原蛋白表達水平。 不同劑量TGFβ作用HSCT6細胞24 h，Ⅰ型膠原蛋白表達水平在1 ng/mL TGFβ組（圖3A， B）。

2.4積雪草酸減少HSCT6細胞Ⅰ型膠原蛋白表達10～30 μmol/L的積雪草酸可以抑制TGFβ活化的HSCT6細胞的Ⅰ型膠原蛋白表達。 溶解積雪草酸（20 μmol/L）組的等體積DMSO無抑制活化的HSCT6細胞的Ⅰ型膠原蛋白表達作用（圖4）。

3討論

TGFβ是重要的致肝纖維化細胞因子之一。 當TGFβ刺激肝星狀細胞時，肝星狀細胞活化、轉化為肌原成纖維細胞，分泌含有大量膠原蛋白的細胞外基質。 HSCT6細胞是經SV40大T抗原轉化的大鼠肝星狀細胞系，具有活化的肝星狀細胞表型［3］。 為了確定HSCT6細胞是否能夠接受外源性TGFβ刺激，產生膠原蛋白表達的變化，不同劑量的TGFβ作用於HSCT6細胞，免疫印記檢測Ⅰ型膠原蛋白的結果顯示1 ng/mL TGFβ誘導HSCT6細胞膠原蛋白表達含量為。 以1 ng/mL TGFβ作用HSCT6細胞，檢測不同時間HSCT6細胞膠原蛋白表達含量，結果顯示在24 h Ⅰ型膠原蛋白表達水平。 外源性TGFβ誘導HSCT6細胞膠原蛋白表達的劑量和時間測定結果表明TGFβ可以刺激HSCT6細胞高表達Ⅰ型膠原蛋白，HSCT6細胞系可作為篩選治療肝纖維化葯物的細胞模型。

抑制肝纖維化可以通過抑制肝星狀細胞（HSC）的增殖，促進HSC細胞的凋亡，上調TGFβ/Smad信號途徑中的負反饋信號Smad7，以及減少抑制性組織金屬蛋白酶（TIMP）等多種途徑實現抑制細胞外基質（ECM）過度增生［4-5］。 10~30 μmol/L積雪草酸作用於TGFβ激活的HSCT6細胞，可以有效抑制其Ⅰ型膠原蛋白表達水平。 在同樣劑量范圍內，積雪草酸對HSCT6細胞的增殖無顯著抑製作用，同時也沒有顯著的細胞毒性作用。 本研究表明積雪草酸抑制活化的HSCT6細胞的Ⅰ型膠原蛋白表達與抑制HSCT6細胞的增殖和積雪草酸產生的細胞毒性作用無關。 在我們的研究中有數據顯示10~20 μmol/L 積雪草酸無明顯地促進HSCT6細胞凋亡作用，小於30 μmol/L積雪草酸對Ⅰ型膠原蛋白合成的抑製作用與積雪草酸誘導凋亡作用似乎無關。 積雪草酸抑制HSCT6細胞Ⅰ型膠原蛋白合成與Smad2/3和Smad7以及TIMP分子之間的關系需進一步研究。

【參考文獻】［1］Maquart FX， Wegrowski Y. Triterpenes from Centella asiatica stimulate extracellular matrix accumulation in rat experimental wounds［J］。 Eur J Dermatol，1999，9（4）：289-296.

［2］謝舉臨， 利天增， 祁少海，等。 積雪草甙對體外培養的成纖維細胞的作用［J］。 中山醫科大學學報， 2001， 22（1）： 41-43.

［3］Silke Vogel， Roseann Piantedosi， Jorge Frank， et al. An immortalized rat liver stellate cell line （HSCT6）： A new cell model for the study of retinoid metabolism in vitro［J］。 J Lipid Res， 2000， 41： 882-893.

［4］Bioaller R，Brenner DA. Liver Fibrosis［J］。 J Clin Invest， 2005，115：209-218.

［5］Friedmen SL. Mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic implications［J］。 Nature Clin Prac Gastroenterol Hepatol，2004，1：98-105.

『陸』 I型膠原蛋白可用什麼溶劑溶解具體用量如何把握

這個不清楚，不過膠原蛋白對皮膚很好的，有很好的抗皺效果，現在像fancl、艾詩緹的產品成分中就含有了膠原蛋白，膠原蛋白不僅可以抗皺，還有著很好的美白、保濕效果，有需要的朋友可以到艾詩緹的官網看看啊。

『柒』 鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解

醋酸就可以.

1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。

2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，並小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。

3．稀釋一定數量的膠原溶液。

4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。

5．從包被表面除去多餘的液體。過夜乾燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。

『捌』 骨膠原蛋白詳細資料大全

骨膠原蛋白（bone collagen）也稱"骨膠原"，骨基質的90%由膠原組成。

基本介紹

• 中文名 ：骨膠原蛋白
• 性質 ：膠原蛋白
• 原料 ：真皮里的纖維細胞
• 原理 ：令纖維細胞變得不規則和發大

概述,稀酸處理,原料來源,合成,臨床套用,

概述

一、骨膠原蛋白（bone collagen）也稱"骨膠原"，骨基質的90%由膠原組成。Ⅰ型膠原構成骨膠原，骨Ⅰ型膠原，共3000多個胺基酸，分子量為95000，在化學結構上與結締組織Ⅰ型膠原不同。骨Ⅰ型膠原的交聯部位較少，交聯是經過G醛基賴氨酸被氫硼酸鈉還原後形成的結構。骨Ⅰ型膠原前N端擴展肽被磷酸化，而在結締組織中則未發現翻譯修飾後的前膠原。在胺基酸組成上骨膠原也不同於軟骨膠原，它含有兩種特殊胺基酸，即絲氨酸和甘氨酸，大量絲氨酸以磷酸絲氨酸鹽的形式存在，故在礦化過程中磷酸鹽與骨膠原的結合很重要。骨基質礦化過程中，羥基磷灰石與骨膠原相結合形成正常的骨質。骨的Ⅰ型膠原之間相互交聯，形成骨基質框架；骨膠原的質量、數量也與礦化相關，保持一定的沉積比例。礦化過程還需有骨基質中的非膠原蛋白，即骨鈣素、基質蛋白等的參與，Ⅰ型膠原不僅給骨鈣素提供結構場所，還與骨鈣素等非膠原蛋白相結合，形成網路支架，為骨礦化提供基本條件。，其他類型膠原如III型和V型膠原，在骨組織中含量較低，且其主要作用是輔助調節I型膠原的纖維直徑。

稀酸處理

骨經稀酸處理後，除去無機成分的殘留物，占人體蛋白質總量的30%～40%，分布在人體肌肉連線的肌腱、關節連線的軟骨組織和結締組織及皮膚的真皮層中。能促進鈣、磷等無機質在骨骼上的沉積，因而能起到修復骨組織、改善骨質疏鬆症狀、促進身體健康的作用。骨膠原也是組成人體肌肉、皮膚的重要成分，對於保持骨骼的韌性、人體運動的協調性及皮膚的彈性有很重要的作用。

原料來源

骨膠原蛋白基本採用葯用明膠為原料。骨膠原蛋白中富含彈力蛋白，對於改善皮膚鬆弛，延緩衰老的效果會更明顯。因此無論從工藝還是效果上，純骨膠原蛋白更適合為人體吸收。

合成

骨膠原分子主要是由成骨細胞合成，軟骨細胞也可合成，同時還合成和分泌一些非膠原性蛋白。骨膠原不能被稀酸或中性鹽溶液所溶解。由於骨在正常狀態下不斷進行轉換即重建，膠原也不斷裂解，其降解產物一方面被移除，一方面又進行合成。

臨床套用

骨是一種具有獨特結構高密度的結締組織，在膠原的有序排列基礎上礦化，以提供人體的機械支持功能。骨膠原的合成減少及膠原纖維的排列不足是造成骨礦化不足的基礎。骨小梁的基質主要由礦物質和膠原纖維絲構成，在正常的骨小樑上，70%～80%的部位有新的膠原纖維絲形成；而骨質疏鬆時，穿孔的骨小樑上僅有不足20%的部位上有新的膠原纖維形成，這種膠原的病損和骨礦物質含量的減少造成了骨小梁本身性能的變化。骨中HYP含量能直接反映骨代謝情況，其敏感性、特異性、穩定性均高於以往骨生化指標，對早期診斷骨質疏鬆、判斷葯物療效及機制、預測骨折危險性具有重要價值。研究證實是由於骨膠原合成減少、分解代謝增強，給無機質礦化提供框架的機械支持功能降低，即使有足夠的鈣鹽也無法沉積礦化。治療應在增加骨膠原含量的基礎上，適當補鈣，使得補充的鈣鹽有沉積礦化的基礎。雌激素和降鈣素治療骨質疏鬆，能使骨膠原含量增高，增強骨礦化，使骨的抗壓縮抗折彎能力增強，脆性降低，韌性增強。

『玖』 什麼物質可以溶解膠原纖維

由於膠原蛋白的特殊分子結構: Gly-Pro-X or Gly-X-Hyp. X為其他氨基酸，酶解膠原纖維最好使用膠原酶（Collagenase）。

根據特異性不同，膠原酶可分為膠原酶I, II, III, IV 和 V型。

當然，膠原纖維是蛋白質，可以用強酸非特異性水解。

『拾』 正在做細胞的三維培養，用的是BD公司的I型膠原和matrix gel膠，但怎麼不凝啊

博凌科為解答：沒有用過BD公司的膠原，但使用過Sigma的I型膠原(固體)，一般是自己配製成液態，然後根據需要按一定比例添加10x濃縮培養基及血清(保證 細胞的營養)，用1M濃度的NaOH調節pH值約7.2，再和細胞混合均勻後添加到培養器皿中，直接放到37度培養箱，一般也就是30分鍾左右即可凝固， 等完全凝固後，再在其上添加培養基。膠凝固後，由於其內添加了培養基，所以一般是粉色的。另外，你在添加NaOH及培養基後，測沒測過膠原的pH值？再者會不會在膠原中添加培養基量太多？培養基占的比例大，也會影響到膠原凝固。