鼠尾膠原怎麼包被培養板

⑴ 復甦的細胞為什麼不貼壁

齊氏生物認為復甦細胞是否貼壁跟你凍存時的操作有直接關系。而且細胞的傳代數越多，即細胞越老，越禁不起低溫的折騰。復甦後，細胞有個休眠期，大約7-14天不等。只要不死，你就慢慢養著。突破了某個時間點，你會發現細胞又神奇的康復了。但要等到細胞狀態良好，傳2代以上再做實驗。尤其是流式、RNA干擾之類的。
細胞不好貼壁，細胞生物學專家CHI
scientific
建議您嘗試以下6點：
復甦後洗滌一下,畢竟DMSO影響細胞的生長。
最好用塑料瓶培養,如果是玻璃瓶,那麼可以用鼠尾膠原包被一下培養瓶,或者用鹽酸對培養瓶進行蝕刻,效果應該還可以，或者塗
fibronectin/collagen
/BSA，也可以幫助細胞貼附

還有就是你的凍存的細胞是否是完全死了,如果是的話是不可能貼壁的,因此在復甦後我建議你用台盼蘭染色看一下死細胞和活細胞的數目及比例.

4.換液時間延長，盡量不要用力搖動。
5.盡量縮短復甦時間
6.操作的環境溫度最好不要變動太多。

希望能幫到你！

⑵ 求助原代肝細胞培養問題

原代肝細胞很容易貼壁生長,4小時肯定能貼壁.
「然後就有渾濁的沉澱,那個沉澱是肝細胞吧?」將此沉澱用培養液或pbs稀釋,加台盤藍染色,顯微鏡下觀察,若為活細胞,通常就是肝細胞了,要培養好,最好有大於85%以上的活性.
原代肝細胞最好生長在鼠尾膠原上,也就是用鼠尾膠原鋪板,然後再普細胞.
4小時後換液,然後每20小時左右換液,通常原代肝細胞難以增值,但是維持20天左右沒問題.

⑶ transwell共培養的小室膜上要鋪膠不呢我用0.4um的孔徑，鋪什麼膠呢

細胞遷移實驗步驟（Neuroprobe的使用方法）

1．膜預處理
將48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾膠原置於50ml的離心管。在膜的粗糙面用鉛筆做標記，放入上述溶液中4度過夜。
實驗前將膜取出，放入裝有PBS的培養皿中漂洗一遍，再用飢餓培養基洗一遍，吸去培養基後加入新的飢餓培養基，放入37度培養箱中。
2. 處理細胞
將細胞消化，調濃度1×105個/ml，細胞遷移裝置下層加入166μl含有刺激因子的飢餓培養基。小心鋪好膜（粗面朝下），裝好塑料墊，固定上層裝置。上層加入100μl細胞懸液，遷移4-6h。
3. 固定
小心將膜取下來，在用PBS弄濕的濾紙上掛掉光滑面的細胞，在新的濾紙上粗面朝喚洞上放置，徹底晾乾。然後再甲醇里粗面態鏈冊朝上固定5min，徹底晾乾。
4. 染色
粗面朝下置於結晶紫染液中30min，取出膜用雙蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在載玻片上，數細胞。
這個方法比transwell方便。與boyden chemper法類似。

Transwell法的步驟：
先把小室擦乾凈後在超凈工作台照紫外過夜。如新的小室省略此步。下一步將小室倒扣並小室的底部外側滴加0.1%（還是1%記不清了）的明膠室溫放置20-30分鍾。這是將細胞消化下來，調濃度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培養基。小室上還未乾的明膠甩掉，加細胞放入24孔板里。放入細胞培養箱培養4-6小室。拿出小室甩掉里邊的培養基。小心擦盡小室里邊的細胞（不能碰外邊）。將小室放入裝有600ml結晶紫的24孔板染色帆宏1小時。移到空的24孔板後即可在顯微鏡下觀察了。

⑷ 養細胞用過的裝明膠(1%gelatin)的玻璃瓶如何清洗

博凌科為解答：泡酸清洗即可。注意酸液殘留，多用自來水、超純水沖幾遍明膠和膠原，都帶正電荷，輔助細胞貼壁。膠原更好！鼠尾膠原（collegen）：常用的包被培養皿的基質。1、75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2、將尾巴剪開、去掉皮毛，並剪成小段，抽出銀色的尾鍵；3、把剪碎的尾鍵置於150ml，0.1％消過毒的醋酸中，4℃放置，並不時振盪；4、48h後取上清，4000轉離心30min後，取上清；分裝上清（鼠尾膠）4度保存。有時可繼續向4。中沉澱中加入10－20ml醋酸，重復以上步驟，以制備更多的鼠尾膠。0.1%的醋酸（冰醋酸）應是g/L,和0.9%鹽水所指的一樣，查過冰醋酸的密度是1.04,分析純的冰醋酸的濃度應大於99.5%,因此配製時 基本可以用1ml溶於1L雙蒸水中得到0.1%的醋酸。置於鹽水瓶中10磅10～15分鍾即可，消毒時（包括其它液體消毒），覺得在瓶口與膠塞中放一根棉 繩，消毒完後（必須基本冷卻後再打開壓力鍋，否則膠塞會炸出）扯出棉繩，這種方法最好由於膠原液不能過濾也不能高壓滅菌，所心製取膠原過程當中注意無菌操作，在使用時待凝膠後。放在紫外線下照射過夜，第二天便可使用。

⑸ 復甦的細胞為什麼不貼壁

剛復甦的細胞有時所需時間長且貼壁不牢。細胞冷凍後復甦時，都有不同程度的腫脹，若以50ml培養瓶待細胞長滿瓶底的70%～80%時消化凍存。

特別是培養表面上的電荷密度影響較大。血清中的冷析蛋白和纖維粘連蛋白可在培養表面與細胞間架橋，有利於加快細胞貼附速率。細胞扒早在培養表面上的鋪展除了與以上因素有關外，還與表面情況特別是光滑度有關。

(5)鼠尾膠原怎麼包被培養板擴展閱讀

一般來說，細菌等絕大部分微生物以及原生動物由一個細胞組成，即單細胞生物，高等植物與高等動物則是多細胞生物。細胞可分為原核細胞、真核細胞兩類，但也有人提出應分為三類，即把原屬於原核細胞的古核細胞獨立出來作為與之並列的一類。研究細胞的學科稱為細胞生物學。

細胞體形極微，在顯微鏡下始能窺見，形狀多種多樣。主要由細胞核與細胞質構成，表面有細胞膜。高等植物細胞膜外激山有細胞壁，細胞質中常有質體，體內有葉綠體和液泡，還有線粒體。動物細胞無細胞壁，細胞質中常有中心體，而高等植物細胞中則無。細胞明此中有運動、營養和繁殖等機能。

⑹ 如何用明膠包被細胞培養板

這是由細胞的性質特點決定的。 有些細胞是必須要附著在支持物上才可以生長的，比如肝細胞，胃上皮細胞等等。 而有些細胞可以懸浮生長，比如骨髓細胞白，血病細胞等等。 這些細胞的生長都是需要添加血清的，而不咐鏈是有些人說的，加入血清後會貼壁。
Q1.明膠溶液配置的問題
A1: 用去離子水來配友友即可。國產的行不行要去試驗，保險的就是買進口的。其實通常是買Sigma的gelatin粉末來配就好了，不用買配好現成的。配好的濃縮 液可分裝放-20度長期保存，即將要用的濃縮液可放4度來備用。
Q2.明膠使用濃度的問題
A2:1%是濃縮母液的濃度，使用前才取適量稀釋成0.1%來包被。
Q3.明膠消毒的問題:
A3: Gelatin是用高溫高壓殺菌的， 其他你所說的方法也不是不能用， 只是沒必要。
Q4.明膠包被培養瓶的問題
A4:通常是包被1小時就夠了，然後吸乾，不需要清洗。因為你配gelatin溶液中並沒有含其他有害的物質， 沖洗只是多了一道沒必要的工作。包被完要清洗是Collagen才需要的。
Q5.明膠包被後的培養瓶使用期的問題
A5.這個我不知道，但基本上是越快使用越好。由於包被的過程很快，所以我都是當天包被， 在等的過程中可以去做其他的事，包被即將完成的前20分鍾就開始處理細胞，等細胞收下來包被也就做好了， 馬上就用。 0.1%的明膠適合大多數細胞培養時的包被，在四度放置不會出現凝膠狀。我參考的文獻說內皮細胞用1％的明膠包被，也就是母液，它在四度放置時會適度凝 結。我的內皮細胞用1％的明膠包被效果我覺得還不錯。不管你用包被1小時的方法還是包被4小時的方法，都最好從包被衡告孫開始到使用的間隔不超過一天，包被的容器放置時間越長越不好。

⑺ 鼠尾膠原蛋白為什麼不凝固

缺少蛋白酶。鼠尾膠原蛋白然培養基和一種天然的黏附劑，其中不凝固的原因是缺少蛋白酶，膠原蛋白是生物高跡老唯含槐分子姿培，動物結締組織中的主要成分，也是哺乳動物體內含量最多、分布最廣的功能性蛋白。

⑻ 鋪上鼠尾膠原可以照紫外光嗎

鋪上鼠尾膠原可以照紫兆哪渣外光。紫外光具有消毒殺菌的作用，而鼠尾膠具有大量細菌，使用之前需要消毒殺菌。所以緩游鋪上鼠族悄尾膠原可以照紫外光。

⑼ 胚胎幹細胞培養是如何培養的它的具體操作過程飼養層細胞是成纖維細胞，那它的詳細作用是什麽

【推薦】胚胎幹細胞培養標准化操作規程胚胎幹細胞培養標准化操作規程 6/28/01

目錄漏爛

一、細胞

二、一般培養-保持胚胎幹細胞處於未分化狀態
培養基
細胞復甦
凍存細胞
明膠包被
細胞傳代

三、體外分化
培養基
包被有多聚鳥氨酸/纖維結合蛋白的培養板（使用或不使用蓋玻片）
體外分化方法

四、移植細胞的准備

細胞

多能性胚胎幹細胞產生於小鼠胚泡
1．表達綠色熒光蛋白（EGFP）的B5-ES細胞。由Dr. Nagy的實驗室制備。
2．D3-ATCC; CRL-1934. 我們得到時大約傳了17代。
3．J1-由Dr. Jaenish的實驗室友情提供。我們得到時大約傳了7－9代。
4．J1rtTA-rtTA表達J1細胞，由Dr. Jaenish的實驗室友情提供。
5．表達黃色熒光蛋白的YC5-ES細胞，由Dr. Nagy的實驗室提供。

一般培養--維持ES細胞處於未分化狀態
ES細胞培養用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培養基來阻止細胞的分化。為細胞提供包被有0.1％明膠的平板作為粘附細胞的基質。建議每2－3天從達到80％－90％融合的平板按1：8的比率傳代細胞一次，細胞傳代以後，在將細胞接種在0.1％明膠包被的培養皿之前，通過預先將細胞接種在沒有經過包被的組織培養板2個小時，使分化細胞粘附，從而將分化和未分化細胞分開。將細胞全程置於37℃，5％CO2，100％濕度條件下培養。

培養基
ES:
配製一20×不含DMEM，HS，ESGRO的溶液（該溶液也能用於EB培養基--見下文）。分裝在50ml FALCON管中，（稀釋為2×，每管42ml），貯存在-20℃。通過將21ml該溶液，HS和ESGRO加入450mlDMEM中制備培養基，0.2μm濾膜過濾。貯存於4℃。 註：一瓶DMEM是500ml。

貯存液
DMEM(高糖)
馬血清（HS）
L-谷氨醯胺（200mM）
MEM NEAA（10mM）
HEPES（1M）
β-巰基乙醇（55Mm）
PEST
ESGRO

復甦細胞
細胞被凍存在10％二甲基亞碸（DMSO）中防止結晶的形成，結晶的形成會損害細胞。然而，二甲基亞碸對細胞有毒性，快速的進行細胞復甦是很重要的。

步驟：
1．從液氮中取出一管細胞；
2．將凍存管置於37℃水浴中2分鍾（或放到管內溶液恰好完全溶解）；
3．將細胞轉移到一15ml Falcon管中；
4．加入5ml ES培養基（用培養基沖洗凍存管）；
5．離心3分鍾；
6．棄上清，用2ml ES培養基重懸細胞，至少吹打10次；
7．接種在明膠包被（見下文）的6孔或6cm組織培養皿；
8．孵育。

凍存細胞返頃漏
凍存液
90％HS和10％二甲基亞碸

步驟：
1．1×PBS洗細胞並留少許PBS在培養皿內；
2．用細胞刮刀收集細胞；
3．將細胞轉入15ml Falcon管內並離心3分鍾；
4．棄去上清並將細胞重懸於冷的凍存液中（10cm的培養皿用2ml，15cm的培養皿用6－7ml。）
5．分裝於凍存管內，每管1ml；
6．置－80℃過夜，第二天移入液氮。

明膠包被
准備500ml 0.1％明膠溶液
1．將0.5g明膠溶解在500ml無鈣鎂的PBS中（50－65℃水浴15～30分鍾）。
2．最好在溶液沒有冷卻的情況下通過0.2μm濾膜過濾，貯存在4℃。
包被培養板或培養皿
1．加入足量的明膠溶液覆蓋培養平面（15cm培養皿加乎明2ml，10cm培養皿加0.5～1ml，溶液的量並不重要，只要能完全覆蓋培養表面就行了。）；
2．置室溫30分鍾；
3．去除明膠溶液，將培養板貯存在包裝袋中室溫放置，最好將板子平方，以免明膠污染蓋子和流出培養板。

細胞傳代
建議每2－3天傳代細胞一次，過度生長的細胞會降低細胞的自然分化率，我們建立了一種純化方法來去除分化細胞，在將細胞接種在明膠包被的培養板上之前，通過將分化細胞黏附在沒有包被的組織培養板上去除分化細胞。純化步驟包含在下面的方法中。

1．去除培養液；
2．1×無鈣鎂PBS洗滌；
3．加入1×胰酶EDTA(10×胰酶EDTA用PBS稀釋。)37℃孵育5分鍾。
4．加入ES培養基使胰酶失活；
5．將細胞轉入15ml離心管中離心3min；
6．去除上清，將細胞重懸於2mlES培養基，至少吹打10－20次。
如果加入培養基的量較少會比較容易將細胞團弄散分開。ES細胞有聚集成團的傾向，傳代過程中仔細將細胞弄散分開很重要。這樣可能會減少細胞的自然分化。
7．將細胞接種在沒有包被的組織培養皿中（使用和一開始同樣規格的培養皿）放入溫箱2小時（分化細胞在該時間內將黏附，而ES細胞仍將保持懸浮）；
8．將含有細胞的培養基轉入明膠包被（見下文）的組織培養皿。吹打以確保細胞被分散開（前面已經提到--ES細胞有聚集成團的傾向）
9．建議按1：4－1：10的比率傳代(ATCC)
保持細胞的傳代比率很重要，以我們的經驗，1：8的比率是好的，可以使細胞的自然分化降到最低。當你使用不同規格的培養板進行細胞傳代可以使用表1來計算傳代比率。

體外分化
多能胚胎幹細胞在體內外可以分化為各種類型的細胞。我們的體外分化方法有利於神經前體細胞通過在最少量的培養基內選擇（第3步），在有bFGF存在的情況下擴增（第4步）並最終分化在第5步。細胞全程培養在37℃，5％CO2，100％濕度條件下。
時間線（總時間為27～34天）
第2步；4＋1天 第3步；4－10天 第4步；4天 第5步；10－15天

培養基
EB
配製一20×不含DMEM，FBS，ESGRO的溶液（該溶液也能用於ES培養基--見前述）。分裝在50ml FALCON管中，（稀釋為2×，每管42ml），貯存在-20℃。將21ml該溶液和50ml FBS加入450mlDMEM中制備培養基，0.2μm濾膜過濾。貯存於4℃。 註：一瓶DMEM是500ml。
貯存液
DMEM(高糖)
胎牛血清
L-谷氨醯胺（200mM）
MEM NEAA（10mM）
HEPES（1M）
β-巰基乙醇（55Mm）
PEST（P104U/mlS104μg/ml

ITSFn and N3：
配製一20×不含DMEM/F12的溶液。分裝在15ml FALCON管中，（稀釋為1×，ITSFn 7.05ml，N3 12.55ml），0.2μm濾膜過濾，貯存在-20℃。將該溶液加入DMEM/F12中制備培養基，貯存於4℃。
貯存液
DMEM(高糖)
轉鐵蛋白50mg/ml
胰島素5mg/ml
亞硒酸鈉300μM
黃體酮（20μM）
腐胺（100μM）
PEST（P104U/ml S104μg/ml）
層粘連蛋白100μg/ml
纖維連接蛋白250μg/ml
鹼性rhFGF, 10μg/ml
*在第4步將bFGF加入N3培養基使終濃度為10ng/ml。

ITSFn and N3培養基貯存液的准備
使用無菌的溶劑和稀釋液，在分裝之前要對溶液進行過濾，如果因為某些原因溶液在分裝之前沒有進行過濾，需要在管子上標明以便別人在使用時知道該溶液不能直接用於細胞培養。
貯存液 溶劑，貯存液，稀釋劑和儲存
轉鐵蛋白50mg/ml
胰島素5mg/ml
亞硒酸鈉300μM
黃體酮（20μM）
腐胺（100μM）
PEST（P104U/ml S104μg/ml）
層粘連蛋白（100μg/ml）
纖維連接蛋白（250μg/ml ）
鹼性rhFGF, （10μg/ml）

包被有多聚鳥氨酸/纖維結合蛋白的培養板（使用或不使用蓋玻片）

包被液的准備
多聚-L-鳥氨酸，15μg/ml
把75ml多聚-L-鳥氨酸和425ml 1×PBS混合。貯存在4℃。
纖維結合蛋白，1μg/ml
把0.5ml纖維結合蛋白和500ml 1×PBS混合。

包被過程：
1．加入多聚-L-鳥氨酸，至少2－3小時（過夜也行）
2．吸出多聚-L-鳥氨酸
3．加入纖維結合蛋白，大約1－2小時
4．吸出纖維結合蛋白，放置30分鍾晾乾
5．貯存在4℃
24孔板用200μl，6孔板用500μl。震盪培養板確保溶液能夠覆蓋蓋玻片或培養孔。有時需要劇烈震盪培養板。

體外分化方法

第1步：ES培養基
在LIF（ESGRO）存在的條件下維持細胞培養

第2步：EB培養基
使用細菌培養皿去除LIF後胚狀體的形成需要4天。
1．分散純化細胞（參見上面的細胞傳代部分）
2．純化2小時後將細胞轉入含有ES培養基的50ml Falcon管中，計數細胞取適量體積放入15ml管中離心3分鍾。
3．用2mlEB培養基重懸細胞，吹打至少10次製成單細胞懸液
4．一個15cm的細菌培養皿接種4～5×106個細胞（1個完全融合的組織培養皿通常足以接種4個同樣規格的細菌培養皿）。
5．2天後更換培養基
將胚狀體轉入錐形管中放置3～5分鍾使細胞沉降。棄去上清，將細胞重懸於新鮮培養基並接種在新的細菌培養皿中。
6．用EB培養基培養的第4天將細胞轉入沒有包被的組織培養皿中（這即是細胞的移植步驟）。1個組織培養皿之中放置1個細菌培養皿，在進行第3步之前一天將胚狀體黏附在同樣規格的培養板上。
形成胚狀體需要4天時間。在EB培養基中再培養1天使胚狀體粘附在組織培養皿的表面。這一天被認為是第2步和第3步的分界。

第3步--ITSFn培養基
在最少量培養基中選擇神經前體細胞
1．在胚狀體接種在組織培養皿一天後將培養基換成ITSFn培養基
2．並非所有胚狀體在這一時期都已經發生粘附，因此在移除培養基時要小心謹慎以使大部分胚狀體留在培養皿內。
3．保持細胞在ITSFn中培養大約10天，根據需要更換培養基--大約每隔一天。
觀察細胞形態，神經樣細胞大約出現在第4到第7天。當神經樣細胞能夠被鑒別時，轉入到第4步。步驟的轉換應該在神經前體細胞出現第一個清晰的標志幾天以後，通常是在第3步的第6到第10天。

第4步－N3培養基＋bFGF
通過將神經前體細胞培養在含有10ng/ml bFGF的培養基中進行擴增。
1.PBS洗滌，加入2ml 1×胰酶（1個15cm的培養皿所需胰酶的量根據前文表中的體積）（10×胰酶EDTA用PBS稀釋）
2．37℃孵育5分鍾
3．用4mlEB培養基終止胰酶活性，將細胞轉入錐形管中放置3～5分鍾移出細胞團，將上清移入一新的離心管離心。
4．將細胞重懸於含有bFGF的N3培養基。
5．將細胞接種在包被多聚-L-鳥氨酸/纖維連接蛋白的蓋玻片上（最好將蓋玻片放於24孔培養板或6孔培養板，6孔培養板中每孔放置5個蓋玻片如果是塑料的放置4個，以使最大可能的獲得樣品數量）。24孔板接種3.5×105/孔或6孔板1.7×106/孔。
6．2天後更換培養基

第5步－N3培養基
通過撤除bFGF使神經前體細胞分化
1．細胞被接種在蓋玻片上4天後將培養基換成不含bFGF的N3培養基
2．根據需要換液（大約每隔一天）
3．分化10～15天後固定細胞
移除培養基
PBS洗滌
加入4%福爾馬林
室溫放置30分鍾
PBS洗滌2次
儲存於PBS。長期儲存使用含0.01％疊氮化納的PBS
移植細胞的准備
細胞在胚狀體形成4天以後被移植（相應於體外分化過程中的第2步末細胞被轉種到組織培養板）。正如在前文體外分化中所描述的在移植之前4天開始形成胚狀體。通常再需要一天時間以便將胚狀體移植入一10cm的培養皿。

移植
1．將胚狀體轉移至一15ml 圓錐形管中放置3～5分鍾使胚狀體沉降下來。
細胞被離心3分鍾會更好。放置使之沉降將會去除更多的單個細胞（包括死細胞）而這些細胞可以被離心下來。
2．去除上清將胚狀體重懸於無鈣鎂離子的1×PBS中
3．離心3分鍾
4．去除上清加入1×胰酶（10cm的培養皿加1ml）
5．37℃水浴5分鍾
6．加入5mlEB培養基小心吹打約10次
小心處理細胞很重要，進行細胞傳代分散細胞時不可劇烈吹打。
7．離心2分鍾
8．吸出上清將細胞重懸於500μl EB培養基
9．用光滑的巴斯德吸管小心吹打5次
10．離心2次
11．吸出上清將細胞重懸於100μl EB培養基

煙酸己可鹼標記ES細胞進行移植
1．准備一10μg/ml的煙酸已可鹼染液（雙苯醯亞胺，在冷凍室118）
2．加入1mg（你能稱到的最小量）到5ml EB培養基（製成200μg/ml）
3．將溶液稀釋成10μg/ml （100μl 200μg/ml 溶液和1.9ml EB培養基）
4．如前所述將細胞重懸於2ml煙酸已可鹼染液而不是EB培養基中制備ES細胞懸液，
5．將懸液置於室溫（或冰上）30分鍾
6．離心2分鍾
7．吸出上清將細胞重懸於2ml EB培養基
8．重復一次
9．離心2分鍾
10．吸出上清將細胞重懸於100μl EB培養基並置於冰上。 這是我最近翻譯的一篇有關胚胎幹細胞的文章，譯的不好，但是意思應該還算準確。不好意思，有兩個表格沒有發上，哪位老師告訴我該如何編輯表格。謝謝了！ 謝謝，頂！ 我也頂 很好的帖子哦!我查了好久終於找到了.萬分感謝! 謝謝，現在還沒用到，就當先了解一下好了。再次謝謝！ 謝謝非常感謝 有原文嗎？
如果有可以發到我郵箱（[email protected]）嗎？謝謝！！ 好貼！

能將英文原文貼上嗎？或者發到我的信箱：[email protected]

謝謝！ 不錯不錯，我這里發一些關於幹細胞的相關知識
幹細胞的概念
幹細胞是一類具有自我更新和分化潛能的細胞。它包括胚胎幹細胞和成體幹細胞。幹細胞的發育受多種內在機制和微環境因素的影響。目前人類胚胎幹細胞已可成功地在體外培養。最新研究發現，成體幹細胞可以橫向分化為其他類型的細胞和組織，為幹細胞的廣泛應用提供了基礎。
在胚胎的發生發育中，單個受精卵可以分裂發育為多細胞的組織或器官。在成年動物中，正常的生理代謝或病理損傷也會引起組織或器官的修復再生。胚胎的分化形成和成年組織的再生是幹細胞進一步分化的結果。胚胎幹細胞是全能的，具有分化為幾乎全部組織和器官的能力。而成年組織或器官內的幹細胞一般認為具有組織特異性，只能分化成特定的細胞或組織。
然而，這個觀點目前受到了挑戰。
最新的研究表明，組織特異性幹細胞同樣具有分化成其他細胞或組織的潛能，這為幹細胞的應用開創了更廣泛的空間。
幹細胞具有自我更新能力（Self-renewing），能夠產生高度分化的功能細胞。幹細胞按照生存階段分為胚胎幹細胞和成體幹細胞 。
1.1 胚胎幹細胞
胚胎幹細胞（Embryonic Stem cell， ES細胞）
當受精卵分裂發育成囊胚時，內層細胞團（Inner Cell Mass）的細胞即為胚胎幹細胞。胚胎幹細胞具有全能性，可以自我更新並具有分化為體內所有組織的能力。早在1970年Martin Evans已從小鼠中分離出胚胎幹細胞並在體外進行培養。而人的胚胎幹細胞的體外培養直到最近才獲得成功。

進一步說，胚胎幹細胞（ES細胞）是一種高度未分化細胞。它具有發育的全能性，能分化出成體動物的所有組織和器官，包括生殖細胞。研究和利用ES細胞是當前生物工程領域的核心問題之一。ES細胞的研究可追溯到上世紀五十年代，由於畸胎瘤幹細胞（EC細胞）的發現開始了ES細胞的生物學研究歷程。
目前許多研究工作都是以小鼠ES細胞為研究對象展開的，如：德美醫學小組在去年成功的向試驗鼠體內移植了由ES細胞培養出的神經膠質細胞。此後，密蘇里的研究人員通過鼠胚細胞移植技術，使癱瘓的貓恢復了部分肢體活動能力。隨著ES細胞的研究日益深入，生命科學家對人類ES細胞的了解邁入了一個新的階段。在98年末，兩個研究小組成功的培養出人類ES細胞，保持了ES細胞分化為各種體細胞的全能性。這樣就使科學家利用人類ES細胞治療各種疾病成為可能。然而，人類ES 細胞的研究工作引起了全世界范圍內的很大爭議，出於社會倫理學方面的原因，有些國家甚至明令禁止進行人類ES細胞研究。無論從基礎研究角度來講還是從臨床應用方面來看，人類ES細胞帶給人類的益處遠遠大於在倫理方面可能造成的負面影響，因此要求展開人類ES細胞研究的呼聲也一浪高似一浪。
1.2 成體幹細胞
成年動物的許多組織和器官，比如表皮和造血系統，具有修復和再生的能力。成體幹細胞在其中起著關鍵的作用。在特定條件下，成體幹細胞或者產生新的幹細胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能細胞，從而使組織和器官保持生長和衰退的動態平衡。過去認為成體幹細胞主要包括上皮幹細胞和造血幹細胞。最近研究表明，以往認為不能再生的神經組織仍然包含神經幹細胞,說明成體幹細胞普遍存在，問題是如何尋找和分離各種組織特異性幹細胞。成體幹細胞經常位於特定的微環境中。微環境中的間質細胞能夠產生一系列生長因子或配體，與幹細胞相互作用，控制幹細胞的更新和分化。
1.3 造血干細
造血幹細胞是體內各種血細胞的唯一來源，它主要存在於骨髓、外周血、臍帶血中。今年年初，協和醫大血液學研究所的龐文新又在肌肉組織中發現了具有造血潛能的幹細胞。造血幹細胞的移植是治療血液系統疾病、先天性遺傳疾病以及多發性和轉移性惡性腫瘤疾病的最有效方法。

⑽ 鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解

醋酸就可以.

1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。

2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，並小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。

3．稀釋一定數量的膠原溶液。

4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。

5．從包被表面除去多餘的液體。過夜乾燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。