膠原酶激活用多少濃度的氯化鈣

① 酶的激活劑的分類及其作用和作用機理

激活劑的影響 凡是能提高酶活性的物質都稱為激活劑。大部分激活劑是離子或簡單有機化合物。按照分子大小，可分為三類：

1.無機離子 可分為金屬離子、氫離子和陰離子三種。起激活劑作用的金屬離子有鉀、鈉、鈣、鎂、鋅、鐵等，原子序數在11－55之間，其中鎂是多種激酶及合成酶的激活劑。陰離子的激活作用一般不明顯，較突出的是動物唾液中的α澱粉酶受氯離子激活，溴的激活作用稍弱。
激活劑的作用有選擇性，對另一種酶可能起抑製作用。有些離子還有拮抗作用，如鈉抑制鉀的激活作用，鈣抑制鎂。有些金屬離子可互相替代，如激酶的鎂離子可用錳取代。激活劑的濃度也有影響，濃度過高可能起抑製作用。如對於NADP+合成酶，鎂離子濃度在5－10×10-3M時起激活作用，在30×10-3M時酶活下降。
2.中等大小有機分子 某些還原劑如半胱氨酸、還原型谷胱甘肽、氰化物等，能激活某些酶，打開分子中的二硫鍵，提高酶活，如木瓜蛋白酶、D-甘油醛-3-磷酸脫氫酶等。另一種是EDTA，可螯合金屬，解除重金屬對酶的抑製作用。
3.蛋白質類 指可對某些無活性的酶原起作用的酶。

② sigma的膠原酶可以用PBS配製嗎

sigma的膠原酶不可以用PBS配製
需要用HBSS緩沖液（即hanks液）配製，沒有的話用DMEM也行
上述兩種都含有鈣離子，而膠原酶的活性是有賴於鈣離子的
所以sigma的膠原酶不可以用PBS配製

③ 從組織細胞中獲得酶的粗提取樣品常有哪些方法

從動物胰臟中提取胰蛋白酶,一般是用稀酸將胰腺細胞中含有的胰蛋白酶原提取出來,然後根據等電點沉澱的原理將提取液的pH值調至酸性（pH3.0左右）,使大量的酸性蛋白沉澱出來.經硫酸銨分級鹽析將胰蛋白酶原、胰凝乳蛋白酶原和彈性蛋白酶原沉澱.沉澱物經水溶解並調至pH8.0,用極少量的胰蛋白酶將胰蛋白酶原激活,同時溶液中的胰凝乳蛋白酶原和彈性蛋白酶原也被激活,三種酶原相互作用過程如下：
也可採用從胰臟中提取出胰蛋白酶原,利用合適的提取溶液的pH值促使胰蛋白酶原部分自溶,並通過溶液中Ca2+的環境,使胰蛋白酶原被開始自溶的少量具有活性的胰蛋白酶所激活,轉變為具有活性的胰蛋白酶（胰凝乳蛋白酶原及彈性蛋白酶原亦同時被胰蛋白酶激活成有活性的酶）.
激活後的酶溶液再進一步分離純化.
〔試劑和器材〕
1、試劑
（1）pH2.3.0乙酸化的水溶液
（2）10%（體積分數）乙酸
（3）2mol/L硫酸
（4）固體硫酸銨
（5）無水CaCl2
（6）結晶胰蛋白酶
（7）25%乙醇溶液(含0.015mol/LHCl 、0.05mol/LCaCl2)
（8）95%（體積分數）乙醇
（9）5mol/L NaOH
（10）丙酮
2、器材
（1）胰臟
（2）組織搗碎機
（3）離心機
（4）磁力攪拌器
（5）透析袋、20目篩網、紗布、水浴鍋
（6）燒杯、量筒、刻度吸管、試管、玻璃漏斗
（7）布氏漏斗、抽濾瓶、溫度計、滴管、玻璃攪棒、紗布、pH試紙等
〔方法和步驟〕
方法一
1、 胰蛋白酶原的提取
取新鮮胰臟約150g,剝去結締組織和脂肪,取凈重100g,切成碎塊,在組織搗碎機中搗碎,並加入2倍體積預冷的pH2.3.0乙酸化水溶液,製成勻漿.漿液倒入500mL燒杯中,用10%（體積分數）乙酸調節pH在2.3.0之間,在5～10℃下提取6h以上,並間隙輕輕攪拌.用4層紗布過濾,盡量擠出濾液.組織殘渣中再加入0.5倍體積（約50mL左右）預冷的pH2.3.0乙酸化水溶液再提取一次（放置1～2h）,再用4層紗布過濾.合並兩次濾液,用2.5mol/L硫酸調節濾液pH在2.3.0之間,4℃放置4h（pH始終保持在2.3.0）,使提取液中酸性蛋白沉澱析出.提取液用折疊濾紙於玻璃漏斗中自然過濾,收集濾液,量取體積（約200mL左右）.
濾液中加入粉末狀固體硫酸銨,使溶液達0.75飽和度（每升濾液加492g,5℃）.放置過夜,使胰蛋白酶原完全析出.次日抽濾,棄濾液,壓緊並收集濾餅,即胰蛋白酶原粗品.
2、 胰蛋白酶原的激活
將胰蛋白酶原粗品稱重（濕重）,分次加入10倍體積預冷的蒸餾水（按濾餅重量計算）,使濾餅完全溶解（一般情況濾餅中硫酸銨含量約占餅重1/4）.用5mol/L NaOH將溶液調至pH8.0,慢慢地攪拌下加入固體無水CaCl2使溶液的Ca2+終濃度達到0.1mol/L（要減去一部分氯化鈣與硫酸銨結合生成硫酸鈣的鈣離子）.取出2mL溶液用於測定激活前的蛋白含量及酶活性.原溶液中加入5mg結晶胰蛋白酶,輕輕攪拌均勻,25℃放置2～4h,或4℃放置12～16h,使胰蛋白酶原活化.每隔1h取樣測定胰蛋白酶活性增長情況,直至酶激活速度變慢或停止增長.一般比活可達到3 500～4 000 BAEE單位/mg.留取2mL溶液用於測定激活後的蛋白質含量和酶活性.激活酶溶液用2mol/L硫酸調pH至2.3.0,濾紙過濾,濾去硫酸鈣沉澱,收集濾液,4℃保存備用.
方法二
稱取冷凍豬胰臟100g,在2～5℃下解凍,切成小塊,用組織搗碎機中絞碎成胰漿,在5～10℃存放24h以上,使胰酶自身活化.胰漿中加入25%（質量分數）乙醇溶液250mL（25%乙醇溶液中加0.015mol/L HCl 、0.05mol/L CaCl2）,搗碎機中搗碎1min.胰漿倒入500mL燒杯中,間隙攪拌,溫度20℃左右,活化5～6h.每隔1.5h,吸取2mL活化液用於測定激活後的蛋白質含量和酶活性.
活化反應結束後,胰漿3 500 r/min離心20min,將離心後上清液用二層紗布過濾.濾液置250mL燒杯中,以過濾清液的體積為准,加入粉末狀硫酸銨,攪拌溶解,使溶液硫酸銨飽和度為20%.放置 6h後,3 500 r/min離心20min,保存上清液待用,取沉澱.沉澱分別用適量95%乙醇洗滌過濾,再用丙酮洗滌,過濾.最後將沉澱置於表面皿上自然乾燥,即得胰蛋白酶粗品Ⅰ.
在上述離心上清液中,加入粉末狀硫酸銨,攪拌溶解,使上清液溶液達到55%硫酸銨飽和度,放置 6h後,3 500 r/min離心30min,取離心沉澱,分別用適量95%乙醇、丙酮洗滌,過濾後將沉澱置於表面皿上自然乾燥,即得胰蛋白酶粗品Ⅱ.

④ 氯化鈣常用的含量有多少的

常用氯化鈣有二水氯化鈣和無水氯化鈣之分，還有液體氯化鈣，國標二水氯化鈣含量74以上，無水含量94以上。液體氯化鈣就根據自己的要求配兌，一般含量在20-40濃度不等。

⑤ 30噸鹽水配多少氯化鈣

一般配置氯化鈣濃度在30%左右。所以說氯化鈣用量在10噸。其餘是自來水。
但是氯化鈣溶液具有很高的腐蝕性，設備使用1年後，就可能出現管道腐蝕漏孔。
上海趨寒流體，專業提供低溫載冷劑，冷凍鹽水，以及防腐蝕解決方案。

⑥ 膠原酶的配置

膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配製、消毒滅菌和儲藏。
注意：
因為Ⅰ型膠原酶分子顆粒比胰酶大，不容易過濾，因此可以用蔡式濾器過濾除菌。
鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培養液配製。

⑦ 氯化鈣在微生物培養基中的作用

氯化鈣就是為了提供鈣離子，是某些酶的激活劑，其次是凝固瓊脂的作用。
另外需注意，這個要分開滅菌，因為其中的鈣離子容易與磷酸鹽產生沉澱，當然這主要是一般氯化鈣的量較大。
氯化鈣可以用碳酸鈣代替，如果你想兼顧調節ph的話。

希望能幫助您。^__^

⑧ 氯化鈣在微生物培養基中的作用

氯化鈣就是為了提供鈣離子，是某些酶的激活劑，其次是凝固瓊脂的作用。
另外需注意，這個要分開滅菌，因為其中的鈣離子容易與磷酸鹽產生沉澱，當然這主要是一般氯化鈣的量較大。
氯化鈣可以用碳酸鈣代替，如果你想兼顧調節ph的話。
希望能幫助您。^__^

⑨ 植物激素和鈣離子生理作用探究氯化鈣溶液濃度多少合適

植物激素和鈣離子生理作用探究氯化鈣溶液濃度0.9摩爾合適。

氯化鈣物質的量為100克111克每摩=0.9摩。氯化鈣溶液摩爾濃度為0.9摩.1升=9摩每升（按溶解不增體積算，否則就除以溶液體積），密度是質量除以體積，溶質也會增加溶液的體積（雖然不多） 應該是100除以溶液總體積。

基本分類

濃度指某物質在總量中所佔的分量。

常用的濃度表示法有：

質量百分濃度（質量分數，m/m）：最常用。指每100克的溶液中，溶質的質量（以克計）。

質量百分濃度=(溶質質量(g))/溶液質量(g))×100%=溶質質量(g))/(溶質質量(g)+溶劑質量(g))×100%。

體積百分濃度（體積分數，V/V）：常用於酒類。指每100毫升的溶液中，溶質的體積（以毫升計）。

以上內容參考：網路-濃度

⑩ 膠原酶和胰酶在細胞原代培養中的區別

膠原酶在上皮類細胞原代培養時經常使用，作用對象是膠原組織，因此不容易對細胞產生損傷。消化原代培養的上皮類細胞用此酶效果更好。

胰蛋白酶（簡稱胰酶）是廣泛應用的消化劑.胰蛋白酶是一種胰臟製品,對蛋白質有水介作用,主要作用於賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵,使細胞間質中的蛋白質水介而使細胞分散開,在常用的蛋白酶中由於產品的活力和純度不同,對細胞的消化能力也不同,胰蛋白酶對細胞的作用,取決於細胞類型、酶的活力、配製的濃度、消化的溫度、無機鹽離子、pH以及消化時間的長短等.

膠原酶是一種從細菌中提取出來的酶,對膠原有很強的消化作用.適於消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對細胞間質有較好的消化作用,對細胞本身影響不大,可使細胞與膠原成分脫離而不受傷害.該酶分離效果好,即使有鈣、鎂離子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培養液配製,即操作簡便又可提高細胞成活率,最終濃度200u/mL或0.0.3mg/mL.此酶消化作用緩和,無需機械振盪,但膠原酶價格較高,大量使用將增加實驗成本.