『壹』 transwell 用多少濃度bsa懸浮細胞
染色
粗面朝置於結晶紫染液30min鋪膜（粗面朝）
4再甲醇粗面朝固定5min徹底晾乾新濾紙粗面朝放置徹底晾乾拿室甩掉邊培養基擦盡室邊細胞（能碰外邊）細胞遷移實驗步驟（Neuroprobe使用）
1．膜預處理
48.5ml H2O +1移空24孔板即顯微鏡觀察.5ml 醋酸+150μL 鼠尾膠原置於50ml離管裝塑料墊. 固定
膜取細胞消化室放入裝600ml結晶紫24孔板染色1調濃度拿24孔板加600ml含刺激培養基
3加細胞放入24孔板放入細胞培養箱培養4-6室膜粗糙面用鉛筆做標記放入述溶液4度夜
實驗前膜取放入裝PBS培養皿漂洗遍再用飢餓培養基洗遍吸培養基加入新飢餓培養基放入37度培養箱
2. 處理細胞
細胞消化調濃度1×105/ml與boyden chemper類似
Transwell步驟：
先室擦乾凈超凈工作台照紫外夜新室省略步步室倒扣並室底部外側滴加0.1%（1%記清）明膠室溫放置20-30鍾細胞遷移裝置層加入166μl含刺激飢餓培養基粗面朝放載玻片數細胞
比transwell便取膜用雙蒸水漂洗遍固定層裝置層加入100μl細胞懸液遷移4-6h室未乾明膠甩掉用PBS弄濕濾紙掛掉光滑面細胞
『貳』 transwell共培養的小室膜上要鋪膠不呢我用0.4um的孔徑，鋪什麼膠呢 我用的是密理博的懸掛式
細胞遷移實驗步驟（Neuroprobe的使用方法）
1．膜預處理
將48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾膠原置於50ml的離心管。在膜的粗糙面用鉛筆做標記，放入上述溶液中4度過夜。
實驗前將膜取出，放入裝有PBS的培養皿中漂洗一遍，再用飢餓培養基洗一遍，吸去培養基後加入新的飢餓培養基，放入37度培養箱中。
2. 處理細胞
將細胞消化，調濃度1×105個/ml，細胞遷移裝置下層加入166μl含有刺激因子的飢餓培養基。小心鋪好膜（粗面朝下），裝好塑料墊，固定上層裝置。上層加入100μl細胞懸液，遷移4-6h。
3. 固定
小心將膜取下來，在用PBS弄濕的濾紙上掛掉光滑面的細胞，在新的濾紙上粗面朝上放置，徹底晾乾。然後再甲醇里粗面朝上固定5min，徹底晾乾。
4. 染色
粗面朝下置於結晶紫染液中30min，取出膜用雙蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在載玻片上，數細胞。
這個方法比transwell方便。與boyden chemper法類似。
Transwell法的步驟：
先把小室擦乾凈後在超凈工作台照紫外過夜。如新的小室省略此步。下一步將小室倒扣並小室的底部外側滴加0.1%（還是1%記不清了）的明膠室溫放置20-30分鍾。這是將細胞消化下來，調濃度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培養基。小室上還未乾的明膠甩掉，加細胞放入24孔板里。放入細胞培養箱培養4-6小室。拿出小室甩掉里邊的培養基。小心擦盡小室里邊的細胞（不能碰外邊）。將小室放入裝有600ml結晶紫的24孔板染色1小時。移到空的24孔板後即可在顯微鏡下觀察了。
『叄』 transwell多少24小時
細胞遷移實驗步驟（Neuroprobe的使用方法）1．膜預處理將48.5mlH2O+1.5ml醋酸+150μL鼠尾膠原置於50ml的離心管。在膜的粗糙面用鉛筆做標記，放入上述溶液中4度過夜。實驗前將膜取出，放入裝有PBS的培養皿中漂洗一遍，再用飢餓培養基洗一遍，吸去培養基後加入新的飢餓培養基，放入37度培養箱中。2.處理細胞將細胞消化，調濃度1×105個/ml，細胞遷移裝置下層加入166μl含有刺激因子的飢餓培養基。小心鋪好膜（粗面朝下），裝好塑料墊，固定上層裝置。上層加入100μl細胞懸液，遷移4-6h。3.固定小心將膜取下來，在用PBS弄濕的濾紙上掛掉光滑面的細胞，在新的濾紙上粗面朝上放置，徹底晾乾。然後再甲醇里粗面朝上固定5min，徹底晾乾。4.染色粗面朝下置於結晶紫染液中30min，取出膜用雙蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在載玻片上，數細胞。這個方法比transwell方便。與boydenchemper法類似。Transwell法的步驟：先把小室擦乾凈後在超凈工作台照紫外過夜。如新的小室省略此步。下一步將小室倒扣並小室的底部外側滴加0.1%（還是1%記不清了）的明膠室溫放置20-30分鍾。這是將細胞消化下來，調濃度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培養基。小室上還未乾的明膠甩掉，加細胞放入24孔板里。放入細胞培養箱培養4-6小室。拿出小室甩掉里邊的培養基。小心擦盡小室里邊的細胞（不能碰外邊）。將小室放入裝有600ml結晶紫的24孔板染色1小時。移到空的24孔板後即可在顯微鏡下觀察了。
『肆』 鼠尾膠原蛋白I型，用那一種膠原酶可以溶解
醋酸就可以.
1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。
2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中，並小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。
3．稀釋一定數量的膠原溶液。
4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。
5．從包被表面除去多餘的液體。過夜乾燥。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。
『伍』 細胞粘在鼠尾膠原上，消化了4分鍾細胞也下不來怎麼辦
不鳥可以吃一點葯啊，可以去醫院買一點
『陸』 求細胞遷移實驗步驟（Transwell或細胞劃痕法都可以）
細胞遷移實驗步驟（Neuroprobe的使用方法）
1．膜預處理
將48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾膠原置於50ml的離心管。在膜的粗糙面用鉛筆做標記，放入上述溶液中4度過夜。
實驗前將膜取出，放入裝有PBS的培養皿中漂洗一遍，再用飢餓培養基洗一遍，吸去培養基後加入新的飢餓培養基，放入37度培養箱中。
2. 處理細胞
將細胞消化，調濃度1×105個/ml，細胞遷移裝置下層加入166μl含有刺激因子的飢餓培養基。小心鋪好膜（粗面朝下），裝好塑料墊，固定上層裝置。上層加入100μl細胞懸液，遷移4-6h。
3. 固定
小心將膜取下來，在用PBS弄濕的濾紙上掛掉光滑面的細胞，在新的濾紙上粗面朝上放置，徹底晾乾。然後再甲醇里粗面朝上固定5min，徹底晾乾。
4. 染色
粗面朝下置於結晶紫染液中30min，取出膜用雙蒸水漂洗一遍，粗面朝上放在載玻片上，數細胞。
這個方法比transwell方便。與boyden chemper法類似。
Transwell法的步驟：
先把小室擦乾凈後在超凈工作台照紫外過夜。如新的小室省略此步。下一步將小室倒扣並小室的底部外側滴加0.1%（還是1%記不清了）的明膠室溫放置20-30分鍾。這是將細胞消化下來，調濃度。拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培養基。小室上還未乾的明膠甩掉，加細胞放入24孔板里。放入細胞培養箱培養4-6小室。拿出小室甩掉里邊的培養基。小心擦盡小室里邊的細胞（不能碰外邊）。將小室放入裝有600ml結晶紫的24孔板染色1小時。移到空的24孔板後即可在顯微鏡下觀察了。